PCR產(chǎn)物末端限制酶切位點的切斷情況
| 克隆PCR產(chǎn)物的方法之一，是在PCR產(chǎn)物兩端設計一定的限制酶切位點，經(jīng)酶切后克隆至用相同酶切的載體中。但實驗證明，大多數(shù)限制酶對裸露的酶切位點不能切斷。必須在酶切位點旁邊加上一個至幾個保護堿基，才能使所定的限制酶對其識別位點進行有效切斷。 下表列舉了15種限制酶，分別比較了各種限制酶在其酶切位點旁邊分別加0、1、2、3個保護堿基后的切斷情況。表中的：(-) 為不能切斷；(±) 為不能完全切斷；(+) 為能完全切斷。 結(jié)果顯示，基本上所有限制酶，在其酶切位點旁邊加上3個以上的保護堿基后，可以對其酶切位點進行有效切斷。 |
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