原代細(xì)胞凍存技術(shù)
原代細(xì)胞凍存技術(shù)
1、選用生長(zhǎng)情況好，數(shù)量較多的原代細(xì)胞，凍存前一天換液一次。
2、貼壁細(xì)胞需用0.25％胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來(lái)，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。
3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。
4、沉淀加含DMSO的培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)，調(diào)整至（1-10）×106/ml。
5、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。
6、密封凍存管，封口一定要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。
7、用記號(hào)筆標(biāo)明細(xì)胞種類，凍存日期。
8、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃過(guò)夜）→液氮。
2、貼壁細(xì)胞需用0.25％胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來(lái)，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。
3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。
4、沉淀加含DMSO的培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)，調(diào)整至（1-10）×106/ml。
5、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。
6、密封凍存管，封口一定要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。
7、用記號(hào)筆標(biāo)明細(xì)胞種類，凍存日期。
8、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃過(guò)夜）→液氮。
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