大腸桿菌（E. coli ）的核糖體（70S，M＝380萬(wàn)）由50S （M＝180萬(wàn)） 大亞單位及30S小亞單位 （M＝90萬(wàn)）組成，用簡(jiǎn)單的直線型5—25％蔗糖梯度（在緩沖液中調(diào)制）。合適的緩沖液（0.2mM 醋酸鎂，10mM  Tris—HCL 及60mM 氯化銨）有利于穩(wěn)定70S核糖體并有利于50S及30S 亞基的分離
設(shè)備：
各型超速離心機(jī)（以日立CP—MX為例）但加/減速速率檔次必須在5/5以上，日立STF2封管器，取出梯度用日立DGF—U與帶流動(dòng)他的分光光度計(jì)配套，自動(dòng)分部收集器等）
轉(zhuǎn)頭：
各種垂直管，角式及水平轉(zhuǎn)頭均可完成此實(shí)驗(yàn)，本文以日立P65VT2 垂直管轉(zhuǎn)頭（65000rpm，416000xg，16×5ml）和PS65T水平轉(zhuǎn)頭 （65000rpm，419000xg，            3×5ml）為例
離心管：
P65VT2 5PA 密封管（加滿(mǎn)液體后用日立STF2 自動(dòng)封管器熔封） P65ST 用5PA 薄壁管（梯度液及樣品加至距管口3mm）
梯度液：用緩沖液溶解后調(diào)制5—25％直線型蔗糖梯度（可以用25％，20％，15％，10％，5％，五檔等分總?cè)莘e后在離心管中直立過(guò)夜形成連續(xù)梯度），梯度液上鋪0.35 ml 樣品
離心參數(shù)：
P65VT2轉(zhuǎn)頭：65000rpm×20分，4℃，加速“5”減速“6”
P65ST轉(zhuǎn)頭：65000rpm×45分，4℃，加速“8”減速“8”
結(jié)果：
1．P65VT2轉(zhuǎn)頭：離心后50S亞基OD峰（260mm）在22％蔗糖梯度附近，峰頂距離離心管口約4.5cm，30S亞基OD峰（260mm）在相當(dāng)于蔗糖梯度16％附近，峰頂距管口約3.2cm
2．P65ST轉(zhuǎn)頭：離心后，50S亞基OD峰（260mm）在17％蔗糖梯度附近，距離離心管口約3.3cm，30S亞基峰頂在13％蔗糖梯度附近，峰尖距管口約2.2cm
相比較P65ST的峰更尖銳，分離效果稍?xún)?yōu)。
討論：也可以用其他轉(zhuǎn)頭，（如P40ST，P56ST水平轉(zhuǎn)頭或其他角式轉(zhuǎn)頭，但綜合比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果以P65ST 和P56ST最佳。）

作者：余興明   電話：13764301893,yuxingming@techcomp.cn