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混合劑技術(shù)純化人外周血單核細(xì)胞

瀏覽次數(shù):2141 發(fā)布日期:2011-1-17  來源:www.pricells.com.cn
      混合劑技術(shù)純化人外周血單核細(xì)胞                         

試劑和器材: 
1. 抗凝血?jiǎng)?00mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉;
2. Hepes緩沖生理鹽水(HBS):8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;
3. OptiPrepTM;
4. 臺(tái)式低速離心機(jī);
5. 巴斯德吸管(短型和長(zhǎng)型);

實(shí)驗(yàn)方法:
1. 用乙二胺四乙酸(2mmol/L終濃度)或檸檬酸鈉(38g/L終濃度)作為抗凝劑來收集靜脈血;
2. 在合適的帶帽離心管(可容納5—10ml樣品的15ml管)中,全血與OptiPrepTM(分別為10倍體積和1.25倍體積)輕柔但徹底地混合(反復(fù)顛倒幾下);
3. 在頂端加入約0.5ml Hepes緩沖生理鹽水,并且在20℃,1500g下離心30min;
4. 用緩慢減速程序或不制動(dòng)的方法使轉(zhuǎn)子減速;
5. 從凹液面向下吸取外周血單核細(xì)胞直至距細(xì)胞沉淀約1cm處;
6. 用2倍體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋收集到的外周血單核細(xì)胞,再在250g—500g離心5—10min以沉淀細(xì)胞;

發(fā)布者:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司
聯(lián)系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

標(biāo)簽: 原代細(xì)胞
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