原代細(xì)胞核仁的制備

試劑和器材： 
1. 懸浮緩沖液：0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl^₂、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；
2. 密度阻滯溶液：0.88mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl^₂、10mmol/L Tris-HCl，pH7.5；
3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制劑；
4. 吊桶式低溫低速或高速離心機(jī)；
5. 超聲發(fā)生器；
6. 光學(xué)顯微鏡（相差或普通光學(xué)顯微鏡）；

實(shí)驗(yàn)方法：
   所有操作須在0—4℃完成。
1. 將純化的原代細(xì)胞細(xì)胞核溶于懸浮緩沖液中；
2. 超聲處理懸液10—15s，中間間隔30—40s；
3. 用1g/L美藍(lán)染色，通過相差或普通光學(xué)顯微鏡監(jiān)測核的破裂。通常原代細(xì)胞細(xì)胞核完全破裂需要40—60s的超聲處理；
4. 在離心管中，將超聲處理物加入到一半體積的密度阻滯溶液上，2000g離心20min并收集核仁沉淀；