薄層掃描法定量分析多采用反射法,漫反射光的行為復雜,儀器光路較復雜;以反射吸光度定量分析,僅適用于低濃度范圍,線性范圍較窄;以單波長或雙波長采集數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)量小,精密度低,而多波長掃描儀器價格較昂貴。因此,迫切需要提高薄層掃描儀的光學分辨率、調(diào)整光路減少雜散光的影響、降低薄層色譜掃描儀設(shè)備成本以及對定量分析方法進行研究。

研究主要包括以下四個方面內(nèi)容:

(1)構(gòu)建薄層原位反射光譜的測試系統(tǒng),以“弓”形二維移動方式掃描斑點,設(shè)置間隔記錄時間記錄斑點對應(yīng)位置多個波長下的光度響應(yīng)值。以非那西丁和咖啡因為分析對象,結(jié)果表明非那西丁斑點點樣量在2.00-24.00μg范圍內(nèi),反射吸光度和K-M函數(shù)值與斑點點樣量的線性相關(guān)系數(shù)r分別為0.9805和0.9990,將斑點點樣量范圍縮小到2.00-10.00μg和8.00-24.00μg,線性關(guān)系均達0.9933以上,與反射吸光度相比,K-M值與斑點點樣量線性相關(guān)性更好。

考察速度掃描對定量分析的影響,咖啡因斑點面積上的K/S值隨掃描速度增加而減小,掃描速度在0.962-3.282mm/s范圍內(nèi)對K-M值與斑點含量的線性關(guān)系影響不顯著。

(2)以綠原酸為分析對象,考察薄層原位反射光譜法分析的準確度。以斑點采集對應(yīng)點位置與光強度響應(yīng)的關(guān)系識別薄層定量分析的誤差來源;在波長230.49–374.00nm范圍內(nèi),斑點面積上K-M值與綠原酸含量的線性相關(guān)系數(shù)r=0.9995;薄層色譜掃描儀以金銀花提取液為背景,加樣回收實驗,回收率為100.67%,相對標準偏差(RSD)為1.61%(n=7),表明該方法具有良好的精密度和準確度,可滿足定量分析的需求。

(3)建立多波長薄層原位反射光譜法測定金銀花中綠原酸含量的方法。以含水量為75%微乳液和甲酸(6:1)為展開劑,在聚酰胺薄膜上分離金銀花提取液中的綠原酸。實驗結(jié)果表明,斑點面積上K-M值與綠原酸含量有良好的線性關(guān)系,以外標兩點法計算金銀花中綠原酸的含量為4.983mg/g,RSD為2.35%(n=6),平均回收率為98.87%,RSD為2.90%,檢出限為19ng。高效液相色譜法測得金銀花中綠原酸含量為5.158mg/g。本法測得結(jié)果與高效液相色譜結(jié)果基本一致。

(4)對金銀花提取液薄層色譜分離過程行為進行了分析探索是薄層色譜描儀的應(yīng)用。

經(jīng)薄層分離后,金銀花提取液在聚酰胺薄膜上出現(xiàn)10個斑點,提取分離斑點色譜峰上的光譜圖;對薄層分離過程進行分析,為薄層色譜展開條件的優(yōu)化提供研究基礎(chǔ)。

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