切向流過濾的脫輔基血紅蛋白的制備新方法
一種基于切向流過濾的脫輔基血紅蛋白制備新方法
來自美國俄亥俄州立大學等的科學家們在2020年第117期的《Biotechnology and Bioengineering》雜志上發(fā)表了題為“Novel Manufacturing Method for Producing Apohemoglobin and its Biophysical Properties”的文章。文中，研究人員開發(fā)了一種新的、可放大的脫輔基血紅蛋白（apoHb）生產方法，使用酸化乙醇溶液將疏水性血紅素提取到溶液中，并通過切向流過濾將血紅素從獲得脫輔基蛋白中分離出來。結果顯示，獲得的總蛋白和活性蛋白產量分別為>95%和~75%，且apoHb制備液中殘留的血紅素<1%，SDS-PAGE分析顯示純度>99%。
實驗使用KrosFlo KR2i 切向流過濾系統和中空纖維過濾組件。從HB生產apoHb的工藝現在表面積20cm2的MicroKros TFF過濾器上進行，然后規(guī)模放大到表面積1050cm2的MiniKros TFF過濾器。在兩種規(guī)模條件下，中空纖維均為聚砜材質，MWCO 10kD，內徑0.5mm，長度20cm。純化的oxy-Hb（低于5% metHb）添加到含有3 mM HCl的80%（v/v）EtOH/DI水混合液中，獲得最高蛋白質濃度2mg/mL。對于使用MicroKros過濾器進行的實驗，處理18 mg Hb，流速設置為25 mL/min。對于MiniKros過濾器實驗，流速設置為1.1L/min，包括3個起始量為1g Hb的批次、3個1.2g Hb的批次以及8個2.0 g Hb的批次（以兩根平行的HF組件運行）�？缒壕S持為7±1psi。Hb分散于酸性乙醇溶液后，系統以酸性乙醇連續(xù)洗濾9個體積。血紅素去除后，無血紅素的球蛋白以DI水洗濾5個體積，再以PBS洗濾5個體積。在MiniKros生產規(guī)模，進行最終濃縮步驟，將系統體積降低至最終總蛋白濃度40-115mg/mL。整個工藝在4±1℃的冷室內進行。每次運行后，TFF組件使用DI水徹底漂洗，再以0.1M NaOH 消毒，并保存在0.1M NaOH中。再次使用前，用DI水充分漂洗，以去除保存液。
詳細內容，請參考原文。
原文：I.S.Pires, D.A.Belcher, R.Hickey, et al., Novel Manufacturing Method for Producing Apohemoglobin and its Biophysical Properties. Biotechnology and Bioengineering, 2020, 117(1): 125-145.
KrosFlo® KR2i 切向流過濾系統
KR2i 工作原理
KR2i 主要部件
KR2i ProConnex流路
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