一入十一月，除了秋高氣爽的好天氣外，我想到的最多的便是“雙十一”了。在這個特殊的日子里，各大試劑廠商都會有一些降價促銷的活動。作為檢測細(xì)胞免疫狀態(tài)很重要的指標(biāo)，多重細(xì)胞因子檢測現(xiàn)在越來越受到很多老師的歡迎。為了讓各位老師能夠更好地完成這個實驗，我們在這里獻(xiàn)上一篇使用Cytek全光譜流式細(xì)胞儀檢測多重細(xì)胞因子方法的福利。不久前，Cytek公司與Biolegend的國內(nèi)總代理達(dá)科為生物技術(shù)有限公司一起在上海市第一人民醫(yī)院舉辦了流式培訓(xùn)班。 這次培訓(xùn)班共有約60名學(xué)員，培訓(xùn)的內(nèi)容包括理論指導(dǎo)，樣本制備，上機(jī)操作以及數(shù)據(jù)分析。理論培訓(xùn)中，Cytek公司的科技總監(jiān)沈紅梅博士與達(dá)科為公司的技術(shù)支持介紹了全光譜流式的原理、多色應(yīng)用、多重細(xì)胞因子檢測的方法等內(nèi)容。
   

樣本制備和上機(jī)操作部分
參加培訓(xùn)的學(xué)員共分為四組，完成了16色樣本，磁珠分選及多重（8種）細(xì)胞因子檢測等樣本的制備，并在3激光Cytek Northern Lights^TM全光譜流式細(xì)胞儀上進(jìn)行了收集。很多學(xué)員反饋用Cytek全光譜流式細(xì)胞儀檢測多重細(xì)胞因子，操作非常簡便。而且多色樣本中CD4+CD25+CD127^low的調(diào)節(jié)T細(xì)胞分群非常清晰，體現(xiàn)了光譜流式對于弱表達(dá)標(biāo)志物的卓越分辨率。

 

在數(shù)據(jù)分析的部分
學(xué)員們通過使用De Novo^TM FCS Express 6軟件對多色實驗的光譜流式數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析，并完成了t-SNE分析圖的繪制。此外，還通過使用Biolegend公司的LEGENDplex^TM軟件對多重細(xì)胞因子檢測的光譜流式數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析處理，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線R²都高于0.999，表明具有較高的擬合度。

 

下圖為利用Cytek全光譜流式細(xì)胞儀檢測得到的多重細(xì)胞因子結(jié)果圖，使用B4/PE作為報告通道，R1/APC用于因子分類通道。Beads A門中包含5個細(xì)胞因子的群體；Beads B門中包含3個細(xì)胞因子的群體。如果想了解 檢測多重細(xì)胞因子具體步驟，請點擊下方“閱讀原文”。任何一臺具有藍(lán)色和紅色激光的Aurora或Northern Lights 全光譜流式細(xì)胞儀都能用于這個應(yīng)用的檢測。

經(jīng)Cytek全光譜流式細(xì)胞儀檢測的多重細(xì)胞因子的流式數(shù)據(jù)（FCS files）可以導(dǎo)入LEGENDplex^TM分析軟件進(jìn)行分析，下圖為8個標(biāo)準(zhǔn)品的光譜流式數(shù)據(jù)經(jīng)過軟件分析擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中除了IL-10標(biāo)準(zhǔn)曲線的R²為0.999外，其余因子均為1，R²越接近于1代表標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度越好，樣本檢測值會越準(zhǔn)確。這個結(jié)果也反映了光譜流式在多重細(xì)胞因子實驗中較高的準(zhǔn)確度和靈敏度。圖中橫坐標(biāo)表示濃度單位，以對數(shù)形式顯示。如果想了解具體的LEGENDplex^TM軟件分析多重細(xì)胞因子檢測結(jié)果的方法。 作為助力本次實驗完成的可靠“幫手”，3激光配置Cytek Northern LightsTM全光譜流式細(xì)胞儀，已經(jīng)取得臨床注冊證！