Lonza Bioscience

Lonza Bioscience為全球學術和產業(yè)研究機構的創(chuàng)新性研究提供研究和發(fā)現工具，并為制藥和生物制藥生產提供解決

正常的原代細胞比腫瘤細胞更能代表體內細胞的功能。利用原代細胞研究相關通路的分子機制是更加可靠的。盡管大多數增殖的、腫瘤來源的細胞系可以通過標準的轉染方法(如脂質體轉染或聚乙烯亞胺[PEI])輕松轉染，但轉染原代細胞仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。原代人肝細胞(PHH)是臨床前藥物開發(fā)中確定藥物代謝、轉運和毒性的“金標準”體外模型。

然而，正如非分裂原代細胞都難以轉染一樣，使用者面臨在保持肝細胞分化和特化功能的同時又要達到高效轉染的挑戰(zhàn)。原代肝細胞對操作和環(huán)境變化非常敏感，因此成功轉染這些細胞是非常困難的。

 
為了滿足使用Nucleofector電轉技術轉染人原代肝細胞的需要，在這篇描述了保持細胞功能下的兩個電轉程序：DS-150和EX-147。

用熒光顯微鏡分別檢測pmax GFP^TM質粒DNA和Cleancap mCherry RNA的轉染效率；并分析細胞活力、膽汁管形成、白蛋白分泌和CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6代謝產物的生成。

使用DS-150程序對DNA的電轉效率高達20%，對mRNA的電轉效率高達85%，并持續(xù)培養(yǎng)7天。在最初的轉染后，觀察到存活率、白蛋白分泌和CYP3A4活性的輕微下降，在7天的療程后恢復。轉染的PHH形成了復雜的、分支狀的膽管網絡，并在整個培養(yǎng)過程中保持了良好的形態(tài)。

為了達到更高的效率，使用EX-147程序，在轉染后24小時DNA轉染效率高達68%。然而，隨著時間的推移與未轉染對照相比，細胞活力和特征性肝功能降低，限制了該項目用于短期研究。

綜上所述，對于原代肝細胞，我們開發(fā)了“高效DNA程序”和“高功能mRNA程序”,有效的DNA和mRNA表達并保留功能長達7天，從而改善了主要人類肝細胞在藥物代謝機制研究中的使用。

Lonza不僅能提供高質量的起始材料，以確保肝細胞的高活性和功能性，也提供溫和高效的轉染處理過程。


 

Lonza原代細胞業(yè)務

01 龐大的細胞種類和供者庫

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每種細胞均有適用的培養(yǎng)基供您選擇

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