01

Nucleofection™核轉(zhuǎn)的處理 – 

簡(jiǎn)單的操作方案

步驟一：

獲取目標(biāo)細(xì)胞

步驟二：

混合和結(jié)合

轉(zhuǎn)移至Lonza認(rèn)證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中

步驟三：

選擇Nucleofector™程序，放入電轉(zhuǎn)耗材，按下開始按鈕

步驟四：

用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細(xì)胞轉(zhuǎn)移出來

步驟五:

轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中。Nucleofection™電轉(zhuǎn)后3-8小時(shí)即可檢驗(yàn)
 

02

提高Nucleofection™核轉(zhuǎn)效率

小技巧：

1.準(zhǔn)備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實(shí)驗(yàn)前于37°C下預(yù)平衡。

2.使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度（對(duì)數(shù)生長(zhǎng)）的細(xì)胞。

3.限制胰蛋白酶暴露時(shí)間，仔細(xì)監(jiān)測(cè)細(xì)胞分離情況。

4.根據(jù)優(yōu)化方案進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并使用適量細(xì)胞數(shù)；所用細(xì)胞過少可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡率增加。

5.采用高質(zhì)量DNA，使用內(nèi)毒素去除試劑盒進(jìn)行純化；請(qǐng)通過測(cè)定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度。

6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行離心。

7.離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細(xì)胞沉淀制備成單細(xì)胞懸液，避免對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行額外操作或用移液器槍頭抽吸。

8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后，用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細(xì)胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基。

•輕輕將一次性移液管吸頭置于電轉(zhuǎn)耗材底部，收集細(xì)胞

•將細(xì)胞懸液輕輕接種至制備的多孔板中

•請(qǐng)勿重復(fù)抽吸混合細(xì)胞