細胞來源及優(yōu)勢

1973年，HEK293細胞是從人類胚胎腎臟中分離的上皮形態(tài)細胞、后轉染了5型腺病毒（Ad5）DNA獲得的永生化細胞。自HEK293建系以來，衍生了很多細胞系，主要包括293T、293T/17、293F、293A、293E、293FT、AAV-293、293S等。293細胞系的優(yōu)勢有很多：容易轉染，能夠高效表達目的基因；作為一種哺乳動物細胞，能夠完成復雜的翻譯后修飾，以確保蛋白功能的正確，并且更接近天然人體蛋白，可以降低免疫原性；分泌表達能力強、生長快速，有些細胞系適應無血清培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)，適合大規(guī)模生產(chǎn)。293細胞常常用于生產(chǎn)重組蛋白、疫苗、慢病毒或腺相關病毒載體等。

圖1  293細胞系衍生示意圖

常用的293細胞系

HEK293：是最原始的293細胞，是由原代人胚胎腎細胞轉染Ad5 DNA獲得的永生化細胞，Ad5 DNA序列整合到了19號染色體。該細胞是目前人類腺病毒載體擴增的合適宿主。

293T：是在HEK293基礎上，穩(wěn)轉SV40 T-抗原基因后產(chǎn)生的高轉染效率的衍生株，攜帶SV40復制序列，被廣泛用于逆轉錄病毒生產(chǎn)、基因表達和蛋白表達。

293T/17：是293T的衍生株�？寺�293T細胞，用pBND和pZAP載體檢測，獲得了能夠產(chǎn)生高滴度感染性逆轉錄病毒293T/17的細胞系。

293A：是HEK 293的亞克隆，該細胞包含穩(wěn)定整合的 E1 基因拷貝，能夠提供生成重組腺病毒所需的 E1 蛋白（E1a 和 E1b）。該細胞具有良好的貼壁能力，常用來腺病毒生產(chǎn)、擴增和滴定。

293F：來源于HEK293（F是Fast-growth的首字母），是一種快速生長、轉染效率高的克隆株。該細胞適合用于瞬時轉染，蛋白表達量較高，還能夠在化學成分限定的無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，適合工藝放大生產(chǎn)。

293FT：來源于用SV40大T抗原轉化的293F，是一種快速生長、轉染效率高的克隆分離株。該細胞可穩(wěn)定表達SV40大T抗原，并且促進最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生。293FT細胞能制造高滴度的慢病毒，是制備高滴度慢病毒的最佳宿主。

293E：是由HEK293衍生而來的一株亞克隆。該細胞經(jīng)過工程改造后插入EBNA-1基因（Epstein-Barr 病毒核抗原-1），可穩(wěn)定表達EBNA-1蛋白。EBNA-1蛋白能夠與攜帶EB病毒復制起點（oriP）的重組表達質(zhì)粒相互作用，促進質(zhì)粒在細胞內(nèi)以游離型的方式進行復制，并實現(xiàn)重組蛋白的高效表達，在重組蛋白生產(chǎn)和基因功能研究中應用廣泛。

AAV-293：源自HEK293，AAV-293細胞反式表達腺病毒E1基因，當共轉染三個AAV助質(zhì)粒(一個含ITR的質(zhì)粒，pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時，可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關病毒顆粒。

以上是常用的293細胞系的簡單介紹，希望對大家如何挑選和使用293系列細胞有所幫助。

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