我知道你急，但你先別急。
尊敬的 MCE 客戶，當(dāng)您收到我司抗體時(shí)，您將看到：

 

 

 
儲(chǔ)存溫度

接下來就到了我們最最最最重要的抗體儲(chǔ)存工作！很多小伙伴們對(duì)溫度很是糾結(jié)：4 ℃，?20 ℃，?80 ℃；到底哪個(gè)更好些？其實(shí).....

就 MCE 抗體產(chǎn)品來說，常見保存條件如下：

• 對(duì)于短期儲(chǔ)存：絕大多數(shù)抗體產(chǎn)品在 4°C 可穩(wěn)定保存 1-2 周�？贵w工作液建議當(dāng)天配制當(dāng)天使用。
  對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存：絕大多數(shù)抗體在 -20°C 下可穩(wěn)定保存 1 年。

 
對(duì)于 MCE 其他特殊類型的抗體，如下表所示：

 
儲(chǔ)存位置

儲(chǔ)存位置？這.....平時(shí)都是冰箱哪有位置放哪里，尤其是冰箱側(cè)門架子上，分裝管剛好“站住腳”！
啊啊啊啊啊啊��！施主請(qǐng)自重！萬萬使不得啊~

避雷！

• 避免放在門架上或頻繁開關(guān)的部位：冰箱門架溫度波動(dòng)大，同門開冰箱門找東西時(shí)可能停留時(shí)間較長(zhǎng)，造成的溫度變化。

——將抗體存放在冰箱內(nèi)側(cè)靠近后壁的位置，這是溫度最穩(wěn)定的區(qū)域。

• 不要使用無霜冰箱 (自動(dòng)除霜冰箱)：避雷避雷，無霜冰箱會(huì)自動(dòng)升溫除霜導(dǎo)致抗體被凍融。

 
總之，影響抗體穩(wěn)定性的因素很多，大家一定要避免多次凍融。

Section.02
抗體搭檔: 稀釋液

當(dāng)然，當(dāng)稀釋成工作液，建議當(dāng)天配制當(dāng)天使用。

但是自己配的稀釋液總是不如商品化稀釋液好用，比如抗體活性更持久，更不易長(zhǎng)菌等。許多用商業(yè)化稀釋液稀釋后的抗體工作液保存一年甚至更久仍然有效，這也是商業(yè)化即用型抗體效期很長(zhǎng)的其中一個(gè)關(guān)鍵原因，即稀釋液配方更科學(xué)！

接下來我們拆解一個(gè)適用于 IHC 實(shí)驗(yàn)的稀釋液配方：

 
成分有了，劑量有了，那我們是不是可以自己配了？

且慢，配制操作簡(jiǎn)單，但這其中的工藝可大有名堂！

實(shí)驗(yàn)室自制試劑無法保證配制環(huán)境無菌操作、配制批間差不可控等，這些都會(huì)直接對(duì)抗體性能產(chǎn)生影響。

 
由此可見，選用工業(yè)化生產(chǎn)的試劑，結(jié)果穩(wěn)定性與重復(fù)性更高，給實(shí)驗(yàn)減少一部分不確定性。

MCE 提供多種配方的稀釋液，滿足不同的需求：

 
Section.03
保護(hù)盾: 蛋白酶抑制劑

WB 結(jié)果如同開“盲盒”？條帶時(shí)有時(shí)無？若隱若現(xiàn)？有時(shí)候可能是因?yàn)樗��?mdash;— 蛋白酶抑制劑：避免你的蛋白被降解。

一起來見證“獵殺”時(shí)刻！

使用枯草桿菌蛋白酶 Carlsberg (Subtilisin Carlsberg，SC) 對(duì)溶菌酶進(jìn)行蛋白水解，然后立即添加溶解在二甲基亞砜 (DMSO) 中的 2 mM PMSF 來淬滅反應(yīng)。

圖 1 顯示 SC 可在反應(yīng)開始后 10 分鐘內(nèi)促進(jìn)溶菌酶完全蛋白水解 。加入蛋白酶抑制劑后，不再觀察到蛋白水解片段，而是在凝膠上清晰地看到一條與天然分子具有相似遷移率的條帶，這表明加入 PMSF 后，蛋白水解的溶菌酶的缺口末端重新連接生成天然形式。

圖 1. 溶菌酶的蛋白水解和再連接反應(yīng)^[1]。

難道是意外？再來測(cè)測(cè)別的——測(cè)試 PMSF 對(duì)另一種底物 d-乙內(nèi)酰脲酶蛋白水解反應(yīng)的影響。

d-乙內(nèi)酰脲酶 (d-hydantoinase)：一種來自芽孢桿菌 AR9 的 54 kDa 單體蛋白。在 37 °C 下，以 100:1 w/w 比例的乙內(nèi)酰脲酶與 SC 在 50 mM Tris pH 8.0 存在下進(jìn)行蛋白水解，并通過在中間時(shí)間點(diǎn)收集等分試樣來監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。最后，通過添加 2-3 mM PMSF 猝滅反應(yīng)。圖  2 表明，在添加抑制劑后，部分蛋白水解的乙內(nèi)酰脲酶不再出現(xiàn)碎片化。

圖 2. d-乙內(nèi)酰脲酶的蛋白水解和再連接反應(yīng)^[1]。

蛋白酶抑制劑通過保護(hù)抗體所處“環(huán)境”來間接提高抗體穩(wěn)定性，在抗體制劑中扮演“保護(hù)盾”的角色。主要通過阻斷蛋白酶降解途徑來保持抗體完整性和功能，從而提高抗體藥物或診斷制劑的穩(wěn)定性和安全性。

[1] Sharma A, et al. Serine protease inhibitor mediated peptide bond re-synthesis in diverse protein molecules. FEBS Lett. 2011 Nov 4;585(21):3465-70.