一. 試劑盒說明
mCherry是一種來自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的紅色熒光蛋白,常有于標記和示蹤某些分子和細胞組分。相對于其他熒光,mCherry的好處在于它的顏色和應用最多的綠色熒光蛋白(GFP)能進行共同標記,并且mCherry相對于其他單體熒光蛋白來說也具有卓越的光穩(wěn)定型。本產品將紅色熒光蛋白的基因插入慢病毒介導的載體中,通過flap-Ub 啟動子過表達從而作為報告基因,在細胞中表達。常用于細胞標記后移植追蹤,從而評估移植后細胞的歸巢以及治療效果等。
二.試劑盒組份
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組份 |
Cat: |
儲存條件 |
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紅色熒光蛋白標記液 |
1 ml |
4 ℃ |
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polybrene |
8 μg/ml |
4℃ |
三. 注意事項
紅色熒光標記液避免反復凍融,操作時要戴手套和口罩。該產品僅限于非臨床性科研使用。
四. 操作步驟
細胞傳代培養(yǎng)到6孔板或者6cm盤中12-16小時后,將紅色熒光蛋白標記液0.3ml(6孔板一個孔中)或者0.5 ml(6cm盤)分別與新鮮細胞培養(yǎng)液混勻,比例為0.3ml紅色熒光蛋白標記液中加入0.7ml新鮮培養(yǎng)液和1.0 μl polybrene(終濃度8ng/ml),0.5ml紅色熒光蛋白標記液中加入1.5ml新鮮培養(yǎng)液和2 μl polybrean(終濃度8ng/ml)。預混好的紅色熒光蛋白標記液加入到目的細胞培養(yǎng)皿中,此時細胞密度不宜超過60%。2個小時之內每間隔15-30min輕輕晃動被標記的細胞培養(yǎng)皿,可以達到更好的標記效果,2小時之后培養(yǎng)皿中補充等體積的新鮮培養(yǎng)液,過夜培養(yǎng)后更換成新鮮培養(yǎng)液。48小時之后,在熒光顯微鏡下觀察標記紅色熒光效率。