Brefeldin A中文名布雷非德菌素A使用說明書
Brefeldin A 布雷非德菌素 A (BFA) 是一種內(nèi)酯抗生素，是蛋白質(zhì)運輸?shù)奶囟ㄒ种苿�。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 阻斷分泌蛋白和膜蛋白從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向高爾基體的轉(zhuǎn)運。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 也是一種自噬 (autophagy) 和 mitophagy 抑制劑。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 可抑制 HSV-1病毒，并具有抗癌活性。
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生物活性
體外研究
Brefeldin A 布雷非德菌素 A (BFA) 處理 15 小時或 40 小時，會導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 顯著腫脹，并將其定位轉(zhuǎn)移到正常大鼠腎 (NRK) 細胞的外圍。延長 Brefeldin A 布雷非德菌素 A 處理會導(dǎo)致 MT 和肌動蛋白細胞骨架顯著破壞。BARS 的 ADP-核糖基化是由 Brefeldin A 布雷非德菌素 A 和 ADPR 之間形成結(jié)合物介導(dǎo)的。當與來自 BFA 處理的 CD38+ HeLa 細胞[3]的培養(yǎng)基一起孵育時，BARS 顯示 BAC 結(jié)合。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 在 MDA-MB-231 乳腺癌細胞中誘導(dǎo)不依賴錨定的細胞死亡，抑制 3D 和 2D 培養(yǎng)物中 MDA-MB-231 集落的形成，并抑制 MDA-MB 的遷移和 MMP 9 (基質(zhì)金屬肽酶 9) 活性-231。
MCE 未獨立驗證這些方法的準確性，僅供參考。
溶解性數(shù)據(jù)
動物實驗：
請根據(jù)您的 實驗動物和給藥方式 選擇適當?shù)娜芙夥桨浮?br />
以下溶解方案都請先按照 In Vitro 方式配制澄清的儲備液，再依次添加助溶劑：
——為保證實驗結(jié)果的可靠性，澄清的儲備液可以根據(jù)儲存條件，適當保存；體內(nèi)實驗的工作液，建議您現(xiàn)用現(xiàn)配，當天使用；
以下溶劑前顯示的百分比是指該溶劑在您配制終溶液中的體積占比；如在配制過程中出現(xiàn)沉淀、析出現(xiàn)象，可以通過加熱和/或超聲的方式助溶
方案 一
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% Saline
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 400 μL PEG300 中，混合均勻；再向上述體系中加入 50 μL Tween-80，混合均勻；然后再繼續(xù)加入 450 μL 生理鹽水 定容至 1 mL。
生理鹽水的配制：將 0.9 g 氯化鈉，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理鹽水溶液。
方案 二
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO → 90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理鹽水水溶液 中，混合均勻。
2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-環(huán)糊精）粉末定容于 10 mL 的生理鹽水中，完全溶解至澄清透明。
方案 三
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO → 90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液，此方案實驗周期在半個月以上的動物實驗酌情使用。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 900 μL玉米油中，混合均勻。
方案 四
請依序添加每種溶劑： 10% EtOH → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% Saline
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲備液加到 400 μL PEG300 中，混合均勻；再向上述體系中加入 50 μL Tween-80，混合均勻；然后再繼續(xù)加入 450 μL 生理鹽水 定容至 1 mL。
生理鹽水的配制：將 0.9 g 氯化鈉，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理鹽水溶液。
方案 五
請依序添加每種溶劑： 10% EtOH → 90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲備液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理鹽水水溶液 中，混合均勻。
2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-環(huán)糊精）粉末定容于 10 mL 的生理鹽水中，完全溶解至澄清透明。
方案 六
請依序添加每種溶劑： 10% EtOH → 90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液，此方案實驗周期在半個月以上的動物實驗酌情使用。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲備液加到 900 μL 玉米油中，混合均勻。
實驗參考方法
細胞實驗
將細胞接種于蓋玻片上，用含 3% 多聚甲醛的 PBS 固定（室溫 10 分鐘），隨后用 PBS 洗滌。
用含 0.01% Triton X-100 的 PBS 在室溫下對細胞進行透化處理，時長 7 分鐘。
洗滌蓋玻片（PBS/0.2% Tween 洗滌 3 次），先后用 PBS/0.4% 魚皮明膠 / 0.2% Tween 孵育 5 分鐘、PBS/2.5% 山羊血清 / 0.2% Tween 孵育 5 分鐘進行封閉。
封閉完成后，加入一抗，37℃孵育 45 分鐘，隨后用 PBS/0.2% Tween 洗滌 5 次，每次 5 分鐘。
加入二抗，37℃孵育 30 分鐘，之后按上述相同方法洗滌細胞。
將蓋玻片以 9:1 的甘油 / PBS 混合液（含 0.1% 鄰苯二胺）作為封片劑封片。
MCE 未對這些方法的準確性進行獨立驗證，僅供參考
MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學研究或藥證申報，我們不為任何個人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)
生物活性
體外研究
Brefeldin A 布雷非德菌素 A (BFA) 處理 15 小時或 40 小時，會導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 顯著腫脹，并將其定位轉(zhuǎn)移到正常大鼠腎 (NRK) 細胞的外圍。延長 Brefeldin A 布雷非德菌素 A 處理會導(dǎo)致 MT 和肌動蛋白細胞骨架顯著破壞。BARS 的 ADP-核糖基化是由 Brefeldin A 布雷非德菌素 A 和 ADPR 之間形成結(jié)合物介導(dǎo)的。當與來自 BFA 處理的 CD38+ HeLa 細胞[3]的培養(yǎng)基一起孵育時，BARS 顯示 BAC 結(jié)合。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 在 MDA-MB-231 乳腺癌細胞中誘導(dǎo)不依賴錨定的細胞死亡，抑制 3D 和 2D 培養(yǎng)物中 MDA-MB-231 集落的形成，并抑制 MDA-MB 的遷移和 MMP 9 (基質(zhì)金屬肽酶 9) 活性-231。
MCE 未獨立驗證這些方法的準確性，僅供參考。
溶解性數(shù)據(jù)
動物實驗：
請根據(jù)您的 實驗動物和給藥方式 選擇適當?shù)娜芙夥桨浮?br />
以下溶解方案都請先按照 In Vitro 方式配制澄清的儲備液，再依次添加助溶劑：
——為保證實驗結(jié)果的可靠性，澄清的儲備液可以根據(jù)儲存條件，適當保存；體內(nèi)實驗的工作液，建議您現(xiàn)用現(xiàn)配，當天使用；
以下溶劑前顯示的百分比是指該溶劑在您配制終溶液中的體積占比；如在配制過程中出現(xiàn)沉淀、析出現(xiàn)象，可以通過加熱和/或超聲的方式助溶
方案 一
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% Saline
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 400 μL PEG300 中，混合均勻；再向上述體系中加入 50 μL Tween-80，混合均勻；然后再繼續(xù)加入 450 μL 生理鹽水 定容至 1 mL。
生理鹽水的配制：將 0.9 g 氯化鈉，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理鹽水溶液。
方案 二
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO → 90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理鹽水水溶液 中，混合均勻。
2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-環(huán)糊精）粉末定容于 10 mL 的生理鹽水中，完全溶解至澄清透明。
方案 三
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO → 90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液，此方案實驗周期在半個月以上的動物實驗酌情使用。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 儲備液加到 900 μL玉米油中，混合均勻。
方案 四
請依序添加每種溶劑： 10% EtOH → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% Saline
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲備液加到 400 μL PEG300 中，混合均勻；再向上述體系中加入 50 μL Tween-80，混合均勻；然后再繼續(xù)加入 450 μL 生理鹽水 定容至 1 mL。
生理鹽水的配制：將 0.9 g 氯化鈉，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理鹽水溶液。
方案 五
請依序添加每種溶劑： 10% EtOH → 90% (20% SBE-β-CD in Saline)
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲備液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理鹽水水溶液 中，混合均勻。
2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-環(huán)糊精）粉末定容于 10 mL 的生理鹽水中，完全溶解至澄清透明。
方案 六
請依序添加每種溶劑： 10% EtOH → 90% Corn Oil
Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
此方案可獲得 ≥ 2.5 mg/mL（飽和度未知）的澄清溶液，此方案實驗周期在半個月以上的動物實驗酌情使用。
以 1 mL 工作液為例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 儲備液加到 900 μL 玉米油中，混合均勻。
實驗參考方法
細胞實驗
將細胞接種于蓋玻片上，用含 3% 多聚甲醛的 PBS 固定（室溫 10 分鐘），隨后用 PBS 洗滌。
用含 0.01% Triton X-100 的 PBS 在室溫下對細胞進行透化處理，時長 7 分鐘。
洗滌蓋玻片（PBS/0.2% Tween 洗滌 3 次），先后用 PBS/0.4% 魚皮明膠 / 0.2% Tween 孵育 5 分鐘、PBS/2.5% 山羊血清 / 0.2% Tween 孵育 5 分鐘進行封閉。
封閉完成后，加入一抗，37℃孵育 45 分鐘，隨后用 PBS/0.2% Tween 洗滌 5 次，每次 5 分鐘。
加入二抗，37℃孵育 30 分鐘，之后按上述相同方法洗滌細胞。
將蓋玻片以 9:1 的甘油 / PBS 混合液（含 0.1% 鄰苯二胺）作為封片劑封片。
MCE 未對這些方法的準確性進行獨立驗證，僅供參考
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