Qkine Nodal(Qk029)淋巴結生長分化因子在干細胞多能性維持中的應用
Nodal蛋白（nodal growth differentiation factor Gene，淋巴結生長分化因子）是轉化生長因子β（TGF-β）超家族成員，在胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮關鍵作用。
Nodal與II型激活素受體(ActRII/IIB)結合，導致I型激活素受體(激活素受體樣激酶，或ALK，包括ALK1-7)的募集、磷酸化和激活。一旦被激活，Nodal受體就會募集并磷酸化I型激活素受體（激活素受體樣激酶，或ALK，包括ALK1-7）。
Nodal信號通路可調控內(nèi)胚層與中胚層的胚層特化，同時抑制神經(jīng)外胚層的形成，此外，該蛋白還與腫瘤轉移密切相關。研究證實，重組Nodal蛋白能夠維持胚胎干細胞（hESCs）與誘導多能干細胞（iPSCs）的多能性。
Qkine重組人源Nodal蛋白采用無動物源（AOF）工藝生產(chǎn)，具備穩(wěn)定、一致的生物活性，可確保干細胞多能性維持實驗的重復性。該重組蛋白為分子量25.9kDa的同源二聚體，無標簽、無載體蛋白。
本品亦提供符合GMP標準的細胞治療級產(chǎn)品，如有需求請聯(lián)系上海曼博生物。
一、Qkine人源Nodal蛋白簡介
1. 高純度人結蛋白（UniProt：Q96S42）
2. 5.9kDa（同源二聚體）
3. 通過SDS-PAGE定量密度測定法測定，純度>98%。
4. 不含動物源性成分(AOF)和載體蛋白
5. 在大腸桿菌中表達
6. 本產(chǎn)品由Qkine位于英國劍橋的符合ISO9001:2015標準的工廠生產(chǎn)。
7. 由乙腈和三氟乙酸凍干而成
8. 將樣品重懸于10mMHCl（復溶液A）中，濃度>50µg/ml，如有需要可添加載體蛋白，制備一次性使用的小份，并冷凍保存于-20°C（短期）或-80°C（長期）。
9. 蛋白質別名：Nodal Growth Differentiation Factor, Nodal Homolog,HTX5,Qk29
10. 物種反應性：人類。物種相似性：小鼠-98%、大鼠-98%、牛源-96%*、豬肉-97%*（*序列未經(jīng)證實）
11. 經(jīng)常一起使用：重組人ActivinA蛋白（Qk001）、重組人BMP-4蛋白（Qk038）、重組人BMP-2蛋白（Qk007）
12. 相關探索套裝：iPSC培養(yǎng)試劑盒（Qk512）
13. 質譜分析：具有預期質量的單一物種
14. 從原液瓶中回收率：>95%
15. 內(nèi)毒素：<0.05EU/μg蛋白
二、Qkine人源Nodal蛋白活性
采用P19細胞CAGA熒光素酶報告基因檢測法測定重組Nodal活性。將轉染的P19細胞用Nodal進行系列稀釋處理6小時，每個處理重復三次。測定螢火蟲熒光素酶活性，并以對照Renilla熒光素酶活性進行標準化。數(shù)據(jù)來自Qk029批號204811。EC50=147ng/ml(5.68nM)。
重組nodal蛋白在還原（R）條件下遷移至約14kDa（單體）處，在非還原（NR）條件下遷移至約25kDa（二聚體）處，形成一條主要條帶。未檢測到其他污染蛋白條帶。純化的重組蛋白（3µg）在還原（+β-巰基乙醇，R）和非還原（NR）條件下，經(jīng)15%(w/v)SDS-PAGE電泳分離，并用考馬斯亮藍R250染色。數(shù)據(jù)來自Qk029，批號#204811。
四、Qkine人源Nodal蛋白特色應用
- iPSC衍生的中胚層分化
- iPSC向內(nèi)胚層的分化
- 癌癥研究
- 維持誘導多能干細胞的多能性
- 未分化胚胎干細胞的維持
五、Qkine人源Nodal蛋白背景
Nodal是轉化生長因子β（TGF-β）蛋白家族的成員，該家族蛋白在發(fā)育和成體組織中均參與調控細胞命運。TGF-β家族主要包含三個亞組：激活素和抑制素、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）以及Nodal蛋白。Nodal蛋白以其在胚胎發(fā)育和中胚層形成中的作用而聞名[1,2]。Nodal信號在早期上胚層階段非常關鍵，其功能是維持關鍵多能性因子的表達。Nodal蛋白與BMP共同調控內(nèi)胚層和中胚層胚層的分化，同時抑制神經(jīng)外胚層的形成[2]。
Nodal蛋白以大分子前體的形式合成，經(jīng)切割后生成成熟蛋白，成熟蛋白以二硫鍵連接的同源二聚體形式發(fā)揮功能[2]。TGF-β配體通過I型和II型跨膜絲氨酸/蘇氨酸激酶受體傳遞信號，激活下游Smad信號通路。研究表明，BMP信號通路利用Smad1、Smad5和Smad8，而TGF-β、激活素和Nodal信號通路則通過Smad2和Smad3[1,2,5]。
研究表明，Nodal的表達與TGF-β1和激活素A共同作用，能夠維持人胚胎干細胞(hESCs)在機械應力作用下的多能性[3]。重組Nodal已被證實能夠增加基質金屬蛋白酶2(MMP-2)的分泌，并促進膠質瘤等癌癥模型中的細胞侵襲[3]。對類胚胎（胚胎類器官）的研究表明，Nodal的表達與其他因子（如FGF-2、DKK-1、BMP-4和Wnt信號通路）共同參與軸向模式形成[4]。在hESCs中，重組Nodal被發(fā)現(xiàn)能夠維持其多能性，并阻止其在體外培養(yǎng)中發(fā)生默認的神經(jīng)外胚層分化[2,5]。
六、關于Qkine品牌
QKine總部位于英國劍橋，是一家通過ISO9001:2015認證的公司。作為蛋白質創(chuàng)新的指引者，產(chǎn)品范圍涵蓋了多個應用領域，旨在提高您研究的可重復性。QKine積極支持并創(chuàng)新于新興領域，如類器官和器官芯片、細胞農(nóng)業(yè)、再生醫(yī)學、合成水凝膠和生物打印等。
憑借強大的制造流程，QKine生產(chǎn)高純度、高品質、無動物成分的生長因子、細胞因子和其他復雜蛋白質，目前已上架近100種因子，新的產(chǎn)品還在不斷上架，其中約30%的產(chǎn)品目錄由獨特的產(chǎn)品組成，包括無標簽的熱穩(wěn)定FGF-2（FGF2-G3），頭個無動物、化學成分限定的TGF-β1，用于的干細胞培養(yǎng)基，以及無動物成分的HGF（NK1）。
QKine可以通過提供批量預訂、批量訂單、定制裝瓶和質量保證（QA）來支持規(guī)�；蜕虡I(yè)制造。曼博生物代理可提供Qkine本地化技術支持，如有需要歡迎咨詢了解。
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七、本文資料參考
[1] Kumar A et al. Nodal Signaling Uses Activin and Transforming Growth Factor-β Receptor-regulated Smads. Journal of Biological Chemistry (2001). doi: 10.1074/jbc.M004649200
[2] Pauklin A, Vallier L. Activin/Nodal signalling in stem cells. Development (2015). doi: https://doi.org/10.1242/dev.091769
[3] Lee C-C, Jan, H-J et al. Nodal promotes growth and invasion in human gliomas. Oncogene (2010). doi: 10.1038/onc.2010.55
[3] Saha S, Ji L, de Pablo JJ, Palecek SP. TGFbeta/Activin/Nodal pathway in inhibition of human embryonic stem cell differentiation by mechanical strain. Biophys J. (2008). doi: 10.1529/biophysj.107.119891
[4] Turner DA, Glodowski CR, Alonso-Crisostomo L et al. Interactions between Nodal and Wnt signalling Drive Robust Symmetry-Breaking and Axial Organisation in Gastruloids (Embryonic Organoids). bioRxiv (2016) doi: https://doi.org/10.1101/051722
[5] Vallier L, Reynolds D and Pedersen RA. Nodal inhibits differentiation of human embryonic stem cells along the neuroectodermal default pathway. Developmental Biology (2004). doi: 10.1016/j.ydbio.2004.08.031
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