青光眼是一種慢性進行性的視神經(jīng)疾病，預(yù)計到2030年全球青光眼患者將增至約 8000 萬，其主要病理表現(xiàn)為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGC ）死亡導(dǎo)致視力喪失。高眼壓（IOP）和高齡是最重要誘因，而降眼壓治療做為目前唯一有效的干預(yù)措施，治療后仍有大量患者（60% 歐洲裔和 90% 亞洲裔）出現(xiàn)視力惡化。多項研究指出，線粒體能量代謝異常和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）水平下降可能與青光眼發(fā)病及進展相關(guān)，但尚無明確顯示其與青光眼進展之間的關(guān)聯(lián)程度，以及其作為預(yù)測疾病進展速度的生物標(biāo)志物的潛力。

為了探究線粒體功能紊亂對神經(jīng)退行性病變的潛在原因和后果，2024年5月英國國家健康研究所聯(lián)合倫敦大學(xué)眼科研究所、意大利阿伏伽德羅大學(xué)、瑞典圣埃里克眼科醫(yī)院等多中心開展題為“Peripheral blood mononuclear cell respiratory function is associated with progressive glaucomatous vision loss”的外周血單核細(xì)胞的呼吸功能與進行性青光眼性視力喪失相關(guān)研究，相關(guān)結(jié)果發(fā)表在《Nature medicine》上。

本研究中Seahorse XFe24 設(shè)備測量外周血單個核細(xì)胞中的氧氣消耗（OCR）量。為評估各組間OCR差異是否源于PBMC亞群構(gòu)成的不同，研究者使用美國Orflo Technologies公司的Moxi Go II快速流式細(xì)胞儀對所有受試者的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞群體進行細(xì)胞計數(shù)，并在 FlowJo 平臺上完成亞群分析，確保用于OCR檢測的細(xì)胞濃度準(zhǔn)確一致（8×10⁶ 個細(xì)胞/mL），保證線粒體呼吸功能檢測的可靠性。根據(jù)細(xì)胞大小設(shè)定門控參數(shù)，區(qū)分淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，驗證青光眼患者與對照組 PBMC 亞群組成無差異，排除細(xì)胞類型混雜對 OCR 結(jié)果的干擾（圖Supp Fig. 17）。
 

Supp Fig. 17 對外周血單個核細(xì)胞（PBMC）進行了流式細(xì)胞術(shù)檢測：使用針對單核細(xì)胞（CD14）和淋巴細(xì)胞（CD3 – T cells、CD19 – B cells）的抗體作為陽性對照，使用 IgG1 作為陰性對照（綠色）。
B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞（紅色和藍(lán)色群體）的大小在 5.5 - 8.5um之間，而單核細(xì)胞（橙色）則大于 8.5um。

無需鞘液，60 μl 精準(zhǔn)測定細(xì)胞計數(shù)，CV＜5%，讓 Seahorse XFe24 每孔 8×10⁴ 細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化“零偏差”，保障實驗基礎(chǔ)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

內(nèi)置 561 nm 長壽命激光，CD14/CD3/CD19 一鍵分型，實時質(zhì)控單核/淋巴細(xì)胞比例，排除樣本異質(zhì)性干擾。

免維護、免校準(zhǔn)，從采血到上機 <15 min，COVID 期間也能高效完成 218 例臨床樣本。

本研究以外周血單個核細(xì)胞（PBMC）為模型，發(fā)現(xiàn)原發(fā)性開角型青光眼（POAG）患者 PBMC 線粒體耗氧率（OCR）顯著低于年齡匹配對照，正常眼壓型青光眼患者 OCR 更低；PBMC 總 NAD 水平亦下降，且與 OCR 呈強正相關(guān)。由此，PBMC 線粒體功能及 NAD 水平可作為預(yù)測青光眼進展的新型血液生物標(biāo)志物。
 

美國Orflo Technologies公司是一家非常專業(yè)的細(xì)胞分析儀器研發(fā)和制造企業(yè)，擁有多項專利技術(shù)，產(chǎn)品以庫爾特原理的高精細(xì)胞計數(shù)儀和超快流式細(xì)胞儀為主。

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