螞蟻的生存與社交主要依賴嗅覺,嗅覺感覺神經(jīng)元(Olfactory Sensory Neuron,OSN)必須遵循“一個神經(jīng)元一種受體”的規(guī)則,這是螞蟻識別同伴、導(dǎo)航與歸巢的核心保障。這要求每個嗅覺感覺神經(jīng)元必須從數(shù)百個嗅覺受體(Olfactory receptor,Or)基因中精準(zhǔn)表達單個基因。然而螞蟻的Or基因多以串聯(lián)陣列形式存在,其數(shù)量遠(yuǎn)超果蠅,且調(diào)控機制又獨立于哺乳動物。因此如何實現(xiàn)這種高度專一的基因表達,長期以來都是困擾科研界的謎題。
紐約大學(xué)、佛羅里達大學(xué)等團隊以哈氏滑胸蟻(Harpegnathos saltator)為研究對象,首次揭示了螞蟻通過獨特的轉(zhuǎn)錄干擾機制調(diào)控Or基因選擇性表達的分子路徑,相關(guān)內(nèi)容于2025年10月發(fā)表于《Nature》,題為“Transcriptional interferences ensure one olfactory receptor per ant neuron”。研究團隊聯(lián)合多組學(xué)分析,闡明螞蟻將"有缺陷的轉(zhuǎn)錄終止"轉(zhuǎn)化為精密的調(diào)控工具,實現(xiàn)了"激活一個,沉默全部"的表達模式。
為破解螞蟻Or基因的表達調(diào)控機制,研究團隊?wèi)?yīng)用多組學(xué)聯(lián)合測序(Multiome Sequencing)技術(shù),構(gòu)建了從基因轉(zhuǎn)錄到染色質(zhì)狀態(tài)的完整研究體系:通過單細(xì)胞核RNA-seq(snRNA-seq)與單細(xì)胞核ATAC-seq(snATAC-seq)明確基因表達模式與染色質(zhì)可及性;利用長讀長RNA-seq(Iso-seq)解析轉(zhuǎn)錄本結(jié)構(gòu);借助CUT&RUN技術(shù)分析組蛋白修飾狀態(tài)。
為確保測序數(shù)據(jù)的有效性和針對性,文中多次使用Blue Pippin全自動DNA脈沖場電泳回收儀對測序樣本進行精準(zhǔn)的DNA片段篩選回收,具體實驗步驟:
1、5'-capped/5'-phosphorylated RNA 轉(zhuǎn)錄組測序文庫的片段選擇
5'轉(zhuǎn)錄組測序更側(cè)重“研究基因的結(jié)構(gòu)和調(diào)控機制”,適合探究轉(zhuǎn)錄起始、可變剪接、免疫組庫這些更細(xì)致的問題,能提供更深入的基因調(diào)控信息。在 “5' 端 RNA 測序” 實驗中,先通過 PCR 擴增獲得目標(biāo)片段,然后使用Blue Pippin 全自動DNA脈沖場電泳回收儀進行兩次DNA片段分選(DNA size selection):
首次分選:從 PCR 擴增產(chǎn)物中進行DNA特定片段篩選:200–400 bp ,精準(zhǔn)去除過短(如引物二聚體)或過長(如非特異性擴增產(chǎn)物)的雜質(zhì),確保文庫片段符合NGS測序平臺(NextSeq500/NovaSeq X Plus)的要求;
二次分選:對首次分選后的產(chǎn)物進行二次 PCR 擴增后,再次使用 Blue Pippin 篩選 250–450 bp 的片段,通過DNA片段大小篩選進一步優(yōu)化文庫片段長度分布,提升測序數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,避免因片段長度不均導(dǎo)致的測序偏差。
2、CUT&RUN DNA-蛋白質(zhì)相互作用測序文庫的片段選擇
CUT&RUN(染色質(zhì)免疫沉淀靶向切割與釋放),即核酸酶靶向切割和釋放,是一種使用靶標(biāo)特異性一抗和Protein A - Protein G - 微球菌核酸酶 (pAG-MNase) 分離特異性蛋白-DNA 復(fù)合體的體內(nèi)方法,在CUT&RUN實驗中,文庫構(gòu)建完成后,使用 Blue Pippin全自動核酸切膠儀及2%預(yù)制膠試劑盒,篩選 185–600 bp DNA 片段:
保留與組蛋白結(jié)合的短片段染色質(zhì)(組蛋白修飾相關(guān)的 DNA 片段通常較短),去除過長的基因組 DNA 雜質(zhì),更加精準(zhǔn)的進行靶向DNA回收/獲取,確保測序數(shù)據(jù)主要來源于目標(biāo)染色質(zhì)區(qū)域,提高后續(xù)分析(如組蛋白修飾信號富集)的特異性。
研究團隊最終揭示了螞蟻Or基因選擇性表達的獨特機制:
1. 轉(zhuǎn)錄通讀現(xiàn)象:單個Or基因啟動子被激活后,RNA聚合酶II因轉(zhuǎn)錄終止缺陷(而非多聚腺苷酸化缺陷),會持續(xù)轉(zhuǎn)錄下游所有基因,形成“階梯式”共轉(zhuǎn)錄模式,但轉(zhuǎn)錄水平隨距離增加逐漸降低。
2. 雙向轉(zhuǎn)錄干擾:下游基因的轉(zhuǎn)錄本因無5'帽結(jié)構(gòu)無法翻譯,上游基因則被激活啟動子驅(qū)動的長鏈反義轉(zhuǎn)錄本沉默,最終僅首個激活基因表達功能性蛋白。
3. 染色質(zhì)狀態(tài)特征:Or基因陣列整體富集抑制性組蛋白修飾H3K27me3,且無共享增強子,每個Or啟動子自身包含完整調(diào)控元件。
這一機制既區(qū)別于哺乳動物的“隨機選擇+負(fù)反饋”,也不同于果蠅的“轉(zhuǎn)錄因子確定性調(diào)控”,是螞蟻為適應(yīng)Or基因串聯(lián)擴張而獨立進化的解決方案。
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https://doi.org/10.1038/s41586-025-09664-x
廠家介紹
Sage Science 公司位于美國馬薩諸塞州,2010年成立,專注于核酸領(lǐng)域的樣品制備,2萬篇文獻中應(yīng)用,包括眾多Nature、 Science、 Cell系列的文章,是DNA片段篩選回收領(lǐng)域的行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)。
Blue Pippin全自動DNA脈沖場電泳回收儀:
* 采用雙通道電泳回收專利技術(shù),全自動運行;
* 高精度回收、微量樣品回收、高得率回收;
* 全自動完成DNA片段分選, 軟件中自由選擇需要篩選的片段范圍;
* 免去了切膠純化的繁瑣步驟,比核酸片段篩選磁珠更加精準(zhǔn)可控;
* 用于小片段DNA篩選回收,如小RNA/small RNA文庫回收、cfDNA/ctDNA回收(循環(huán)血游離DNA/循環(huán)血腫瘤DNA);
* 用于大片段DNA(幾kb、幾十kb甚至幾百kb)精準(zhǔn)回收,如Pacbio HiFi文庫構(gòu)建、納米孔測序建庫、超長測序(Ultra Long Sequencing)文庫構(gòu)建等;
環(huán)亞生物科技(APG BIO)作為美國Sage Science公司DNA片段回收系列產(chǎn)品在中國區(qū)的獨家代理商,為國內(nèi)二代測序、三代測序用戶提供測序樣品前處理、質(zhì)控的整體解決方案:組織研磨儀、單細(xì)胞懸液制備儀、細(xì)胞破碎儀、超聲聚焦打斷儀、全自動DNA片段分選回收儀、核酸片段分析儀、脈沖場電泳儀、全自動建庫儀、熒光計、超微量分光光度計等。