細胞轉(zhuǎn)染效率優(yōu)化指南：從培養(yǎng)基到質(zhì)粒用量的五大關(guān)鍵要素解析
細胞轉(zhuǎn)染效率翻倍？Polysciences PEI轉(zhuǎn)染優(yōu)化關(guān)鍵指南（上）
摘要：慢病毒、AAV病毒、蛋白生產(chǎn)等PEI轉(zhuǎn)染工藝參數(shù)優(yōu)化指南。
關(guān)鍵詞：細胞轉(zhuǎn)染,PEI轉(zhuǎn)染試劑,聚乙烯亞胺,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,DNA轉(zhuǎn)染,AAV病毒,蛋白生產(chǎn)工藝,干細胞治療,細胞培養(yǎng),細胞與基因治療
核酸遞送是生物學(xué)研究、轉(zhuǎn)基因和基因治療的重要環(huán)節(jié)。由于核酸酶的普遍存在和核酸的高分子量特性，外源核酸很難獨立進入靶細胞，且易被溶酶體降解。因此，開發(fā)有效的核酸運載體是關(guān)鍵。PEI作為一種核酸運載體，已被應(yīng)用于細胞轉(zhuǎn)染。然而，轉(zhuǎn)染效率和病毒包裝產(chǎn)量受多種因素的影響，曼博生物將從分兩期文章為各位科研伙伴講解細胞轉(zhuǎn)染優(yōu)化的關(guān)鍵方向。
首先，是培養(yǎng)基的選擇，無血清培養(yǎng)基在轉(zhuǎn)染過程中具有較大優(yōu)勢，能夠支持高密度細胞生長且不影響轉(zhuǎn)染效果。血清的質(zhì)量和用量也需重視。建議在無血清或低血清（2%-5%）條件下進行轉(zhuǎn)染，以避免血清中的蛋白因子干擾質(zhì)粒DNA與PEI的結(jié)合。
第二，培養(yǎng)空間與體積。建議在小體積模型中進行條件摸索，選擇合適的培養(yǎng)體積以達到更佳生產(chǎn)效果。對于總?cè)萘啃∮?00ml的搖瓶，培養(yǎng)總體積不超過20%；對于總?cè)萘看笥?00ml的搖瓶，培養(yǎng)總體積不超過30%。
第三，細胞質(zhì)量與狀態(tài)。要選用處于對數(shù)生長期、活力高、代次低（30代以內(nèi)）的細胞進行轉(zhuǎn)染，可獲得更佳效果。細胞匯合度和傳代次數(shù)也會影響轉(zhuǎn)染效率，建議使用低代次細胞以確�；蛐筒蛔�。
第四，細胞密度。建議維持在1~2×10^6/ml，也可嘗試高密度（如5×10^6/ml）以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。
同時，也需關(guān)注質(zhì)粒DNA的質(zhì)量與用量。質(zhì)粒純度應(yīng)滿足A260/A280值在1.8左右，且內(nèi)毒素需清除干凈。質(zhì)粒用量需根據(jù)細胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染試劑的要求進行調(diào)整，一般為1~2μg / 1×10^6細胞。
以上為曼博生物分享的關(guān)于細胞轉(zhuǎn)染的部分優(yōu)化方向，下期將繼續(xù)為大家?guī)砀噢D(zhuǎn)染實踐指南。
摘要：慢病毒、AAV病毒、蛋白生產(chǎn)等PEI轉(zhuǎn)染工藝參數(shù)優(yōu)化指南。
關(guān)鍵詞：細胞轉(zhuǎn)染,PEI轉(zhuǎn)染試劑,聚乙烯亞胺,質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,DNA轉(zhuǎn)染,AAV病毒,蛋白生產(chǎn)工藝,干細胞治療,細胞培養(yǎng),細胞與基因治療
核酸遞送是生物學(xué)研究、轉(zhuǎn)基因和基因治療的重要環(huán)節(jié)。由于核酸酶的普遍存在和核酸的高分子量特性，外源核酸很難獨立進入靶細胞，且易被溶酶體降解。因此，開發(fā)有效的核酸運載體是關(guān)鍵。PEI作為一種核酸運載體，已被應(yīng)用于細胞轉(zhuǎn)染。然而，轉(zhuǎn)染效率和病毒包裝產(chǎn)量受多種因素的影響，曼博生物將從分兩期文章為各位科研伙伴講解細胞轉(zhuǎn)染優(yōu)化的關(guān)鍵方向。
首先，是培養(yǎng)基的選擇，無血清培養(yǎng)基在轉(zhuǎn)染過程中具有較大優(yōu)勢，能夠支持高密度細胞生長且不影響轉(zhuǎn)染效果。血清的質(zhì)量和用量也需重視。建議在無血清或低血清（2%-5%）條件下進行轉(zhuǎn)染，以避免血清中的蛋白因子干擾質(zhì)粒DNA與PEI的結(jié)合。
第二，培養(yǎng)空間與體積。建議在小體積模型中進行條件摸索，選擇合適的培養(yǎng)體積以達到更佳生產(chǎn)效果。對于總?cè)萘啃∮?00ml的搖瓶，培養(yǎng)總體積不超過20%；對于總?cè)萘看笥?00ml的搖瓶，培養(yǎng)總體積不超過30%。
第三，細胞質(zhì)量與狀態(tài)。要選用處于對數(shù)生長期、活力高、代次低（30代以內(nèi)）的細胞進行轉(zhuǎn)染，可獲得更佳效果。細胞匯合度和傳代次數(shù)也會影響轉(zhuǎn)染效率，建議使用低代次細胞以確�；蛐筒蛔�。
第四，細胞密度。建議維持在1~2×10^6/ml，也可嘗試高密度（如5×10^6/ml）以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。
同時，也需關(guān)注質(zhì)粒DNA的質(zhì)量與用量。質(zhì)粒純度應(yīng)滿足A260/A280值在1.8左右，且內(nèi)毒素需清除干凈。質(zhì)粒用量需根據(jù)細胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染試劑的要求進行調(diào)整，一般為1~2μg / 1×10^6細胞。
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曼博生物在此澄清：我司是Polysciences在中國大陸僅有的官方獨家授權(quán)提供，非授權(quán)企業(yè)銷售該品牌產(chǎn)品均屬違規(guī)，貨源多為水貨。請各位老師在采購前務(wù)必核實，選擇曼博生物或我司授權(quán)的經(jīng)銷商，遠離水貨陷阱。
本文基于Polysciences公開資料由其中國提供商上海曼博生物整理，僅用于科研信息分享。上海曼博生物可提供Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑、PEI MAX及相關(guān)細胞轉(zhuǎn)染產(chǎn)品（點擊查看），支持慢病毒包裝、AAV病毒包裝、蛋白生產(chǎn)及細胞與基因治療相關(guān)研究與應(yīng)用。
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