倍性育種是植物育種的重要研究內(nèi)容,通過倍性育種,植物的組織、器官的形態(tài),生理功能,以及產(chǎn)量、品質(zhì)等方面,都發(fā)生了巨大的變化。特別是在許多經(jīng)濟性狀上產(chǎn)生了顯著的改變,而為人們所利用。
倍性育種主要包括單倍體育種和多倍體育種。
單倍體育種是植物育種手段之一。通過單倍體誘導(dǎo)獲得的單倍體植株經(jīng)染色體加倍后即可出現(xiàn)純系植株(2n),從中選出的優(yōu)良純系后代不分離,植株表型整齊一致,并且與傳統(tǒng)育種(6-8代自交)相比可顯著縮短育種年限。
該技術(shù)不僅適合某些特定表型的純合,例如,自交不親和植物的育種,也可以應(yīng)用于快速繁殖、突變育種和轉(zhuǎn)基因育種等方面。
多倍體育種包括同源多倍體育種和異源多倍體育種。其中,同源多倍體較二倍體具有某些器官增大或代謝產(chǎn)物含量提高的特點,對于以收獲營養(yǎng)器官為目的的作物及無性繁殖作物有極好的育種利用價值。
例如,果樹多倍體育種具有以下優(yōu)點:①能利用無性繁殖固定多倍體的優(yōu)良性狀。②能利用少籽或無籽的多倍體。奇倍數(shù)多倍體大多高度不育,無籽則恰好是果品的優(yōu)良經(jīng)濟性狀。

圖:三倍體葡萄
另外,人工創(chuàng)造多倍體也可以將野生種與栽培種的遺傳物質(zhì)重組,育成新型作物,即異源多倍體育種。
倍性育種,倍性分析是關(guān)鍵
那么,如何在倍性育種時鑒定倍性呢?傳統(tǒng)來說有兩種方法:表型觀察法和壓片計數(shù)染色體法。傳統(tǒng)的表型觀察法雖能在一定程度上篩選倍性材料,但是植物倍性較高時,多倍體并不都展示巨大化,這就降低了材料鑒定的準(zhǔn)確性。其他的保衛(wèi)氣孔觀察等方式也存在很多誤讀,所以表型觀察是準(zhǔn)確率最低的方法。
壓片計數(shù)染色體法雖然篩選最為準(zhǔn)確,可直接用顯微鏡數(shù)出細胞核內(nèi)的染色體條數(shù),并拍攝到染色體形態(tài)。但是該實驗步驟繁瑣耗時很長,檢測一個材料需要長達十多個小時, 且對操作者技術(shù)要求很高,沒有大量經(jīng)驗通常都無法完成實驗,而且對材料要求嚴格,所以壓片計數(shù)法不適于大規(guī)模篩選倍性材料。

相比之下,運用流式細胞術(shù)進行倍性檢測,工作效率可以大大提高,使用我們的Sysmex Partec儀器每天可檢測多達400個樣本的倍性。
流式細胞術(shù)檢測倍性時,先將葉片等組織放入培養(yǎng)皿,再加入細胞核提取液切碎,過濾之后再加入熒光染液,5秒之后即可上機測試(Sysmex專用試劑盒)。細胞核流過激光時就會被激發(fā)出相應(yīng)強度的熒光,倍性越高熒光越強,之后我們就從軟件看到不同倍性細胞的峰圖。流式檢測動植物基因組大小也是同樣原理。

流式細胞術(shù)原理圖

流式細胞儀自動生成峰圖
(左圖是二倍體,主峰在橫坐標(biāo)100位置。右圖是四倍體,主峰在200位置)
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(1) Yang T, Liu R, Luo Y, et al. Improved pea reference genome and pan-genome highlight genomic features and evolutionary characteristics[J]. Nature Genetics, 2022: 1-11.
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