首先，是質(zhì)粒比例。對(duì)于AAV包裝，載體質(zhì)粒：復(fù)制&包裝質(zhì)粒：轉(zhuǎn)移目標(biāo)基因的初始建議質(zhì)粒比例為2:1.5:1。

其次，PEI與質(zhì)粒DNA的比例直接影響復(fù)合體的穩(wěn)定性，建議從2:1開(kāi)始優(yōu)化。

同時(shí)，孵育體積影響質(zhì)粒DNA與PEI復(fù)合體的形成和與細(xì)胞的有效接觸。建議孵育體積維持在總培養(yǎng)體積的5%-10%。

對(duì)于孵育方式與時(shí)間，推薦采用AB液的形式，即分別配置質(zhì)粒DNA溶液和PEI溶液，然后將PEI溶液加入質(zhì)粒DNA溶液中。孵育時(shí)間建議控制在10-20分鐘。

最后，由于病毒顆粒的收獲時(shí)間影響病毒滴度，因此建議慢病毒在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)收獲，AAV病毒在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)收獲。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的成功依賴于對(duì)多個(gè)參數(shù)的嚴(yán)格優(yōu)化，希望這兩期PEI轉(zhuǎn)染試劑關(guān)鍵參數(shù)的分享能為科研伙伴提供實(shí)用的參考。

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