中法聯(lián)合開發(fā)即用型三通道數(shù)字PCR新冠病毒核酸檢測(cè)方案抗擊全球新冠疫情。日前，Stilla Technologies發(fā)布：基于3色NaicaTM微滴芯片式數(shù)字PCR的2019-nCoV新冠病毒的核酸檢測(cè)方案，并公布該解決方案的性能數(shù)據(jù)，此方案由法國(guó)Stilla Technologies、艾普拜生物科技（蘇州）有限公司和我司北京深藍(lán)云生物科技有限公司共同開發(fā)完成。

 

Stilla Technologies公司發(fā)布信息原文鏈接：

https://www.stillatechnologies.com/a-3-color-crystal-digital-pcr-kit-for-detection-of-covid-19/

北京深藍(lán)云生物科技有限公司發(fā)布信息鏈接：

http://www.cycloudbio.com/product/36748.html

 

北京深藍(lán)云生物科技有限公司作為Stilla Technologies中國(guó)技術(shù)示范與服務(wù)中心，給出如下中文翻譯：


▶  一步式RT-dPCR方法2019-nCoV
 

（COVID-19）核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明
 

2019-nCoV（COVID-19）新冠病毒已被世界衛(wèi)生組織宣布為國(guó)際關(guān)注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件。為了促進(jìn)衛(wèi)生當(dāng)局的行動(dòng)，開發(fā)可靠的檢測(cè)試劑至關(guān)重要。
 

蘇州艾普拜生物（位于江蘇醫(yī)療器械科技產(chǎn)業(yè)園）利用已公開的2019-nCoV和其他SARS相關(guān)的病毒序列，以及特異性檢測(cè)2019-nCoV的PCR檢測(cè)方法(Chan et al.，2020)，開發(fā)基于3色NaicaTM微滴芯片式數(shù)字PCR平臺(tái)的2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR的核酸檢測(cè)試劑盒（圖1），利用FAM標(biāo)記探針檢測(cè)2019-nCoV（COVID-19）新冠病毒RNA正鏈的ORF1ab基因、HEX標(biāo)記探針檢測(cè)N基因、CY5標(biāo)記的內(nèi)參基因（人類看家基因），可同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)獨(dú)立的2019-nCoV（COVID-19）新冠病毒序列，同時(shí)可監(jiān)控RNA樣本質(zhì)量和PCR擴(kuò)增的有效性（圖2）。

 

圖1：即用型2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR的核酸檢測(cè)試劑盒，包含在NaicaTM微滴芯片式數(shù)字PCR平臺(tái)使用的全部試劑。（* 僅供科研使用）

 

圖2：NaicaTM  Crystal Miner分析軟件自動(dòng)生成的2D（左），3D點(diǎn)圖（右）和微滴原始圖像。檢測(cè)樣本為試劑盒的陽(yáng)性對(duì)照。
 

FAM和HEX標(biāo)記的探針特異地靶向2019-nCoV（COVID-19）基因組的ORF1ab和N基因，Cy5標(biāo)記的探針檢測(cè)人類看家基因。
 

閾值線由Crystal Miner軟件自動(dòng)生成，也可參照試劑盒說(shuō)明書設(shè)定。

 

▶ 2019-nCoV檢測(cè)的特異性和靈敏度
 

以1ng人類RNA為背景，將合成的2019-nCoV（COVID-19）靶標(biāo)序列連續(xù)稀釋七個(gè)點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)并重復(fù)三次。結(jié)果表明，在所有測(cè)試樣本中，2019-nCoV（COVID-19）的ORF1ab基因(FAM)從80個(gè)拷貝到5個(gè)拷貝，N基因(HEX)從120個(gè)拷貝到7個(gè)拷貝均能檢測(cè)到。對(duì)樣本進(jìn)一步稀釋，上述兩種基因在每25µl反應(yīng)中可檢測(cè)到2個(gè)拷貝。（圖3）同時(shí)以人RNA為陰性對(duì)照（15個(gè)孔）進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)假陽(yáng)性結(jié)果。

圖3：2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR核酸檢測(cè)試劑盒的靈敏度評(píng)測(cè)。
 

檢測(cè)在1ng人類RNA背景下合成的2019-nCoV（COVID-19）靶標(biāo)序列的系列稀釋液。

豎線表示置信度為95%時(shí)平均值的置信區(qū)間。

空?qǐng)A圈表示未檢測(cè)到2019-nCoV（COVID-19）。

 

▶ 應(yīng)用亮點(diǎn)
 

★ 2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR的核酸檢測(cè)試劑盒是即用型核酸檢測(cè)試劑盒，在一個(gè)反應(yīng)中即可完成兩個(gè)2019-nCoV（COVID-19）靶標(biāo)序列進(jìn)行絕對(duì)定量檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)內(nèi)參基因監(jiān)控RNA樣本質(zhì)量和PCR擴(kuò)增有效性。

★ 使用NaicaTM微滴芯片式數(shù)字PCR平臺(tái)進(jìn)行的2019-nCoV（COVID-19）靶標(biāo)序列進(jìn)行特異性和靈敏度檢測(cè)，可觀察到低至5個(gè)拷貝的ORF1ab基因和7個(gè)拷貝的N基因。

★以人RNA為陰性對(duì)照，15個(gè)樣本均未觀察到假陽(yáng)性。

 

【參考資料】

1. Chan JF, Yip CC, To KK, Tang TH, Wong SC, Leung KH, Fung AY, Ng AC, Zou Z, Tsoi HW, Choi GK, Tam AR, Cheng VC, Chan KH, Tsang OT, Yuen KY. Improved molecular diagnosis of COVID-19 by the novel, highly sensitive and specific COVID-19-RdRp/Hel real-time reverse transcription-polymerase chain reaction assay validated in vitro and with clinical specimens. J Clin Microbiol. 2020 Mar 4.

2. Stilla Technologies. A 3-color Crystal Digital PCR kit for detection of COVID-19. 

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