方案摘要：管碟法是抗生素效價測定的 “金標準” 之一，其核心在于通過 “平行線原理” 實現(xiàn)標準品與供試品的精準對比，雖操作繁瑣，但能直接反映抗生素的生物活性，在藥品質(zhì)量控制中具有不可替代的地位。為提升檢測效率，本方案使用了自動菌落計數(shù)儀，設定好程序之后，通過儀器的圖像采集與分析功能，精準識別抑菌圈邊界、排除干擾（如菌落、培養(yǎng)基雜質(zhì)）并計算關鍵參數(shù)（如直徑、面積），有效減少人工誤差，提高檢測效率。
 
方案詳情：
一、實驗原理
      管碟法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴散作用，比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。
二、‌實驗準備
1、設配和材料
① 自動菌落計數(shù)儀；
② 平底雙碟；
③ 不銹鋼小管。
 
2、試劑和材料
① 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）懸液；
② 短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）懸液；
③ 金黃色葡萄球菌（Szaphylococcus aureus）懸液；
④ 藤黃微球菌（Micrococcus luteus）懸液；
⑤ 大腸埃希菌（Escherichia coli）懸液；
⑥ 啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）懸液；
⑦ 肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）懸液；
⑧ 支氣管炎博德特菌（Bordetella bronchiseptica）懸液。
⑨ 營養(yǎng)瓊脂。
 
三、實驗步驟
1、標準品溶液的制備以及標準品的使用和保存，應照標準品說明書的規(guī)定。臨用時照表1的規(guī)定進行稀釋。
2、供試品溶液的制備：精密稱（或量）取供試品適量，用各品種項下規(guī)定的溶劑溶解后，再按估計效價或標示量照表1的規(guī)定稀釋至與標準品相當?shù)臐舛取?br />  
 
　注：①    兩性霉素B雙碟的制備，用菌層15ml代替兩層。
　　  ② 乙酰螺旋霉素，抗II檢定培養(yǎng)基制備時，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為8.0～8.2。
　　  ③ 含3%氯化鈉。
　　  ④ 加0.3%葡萄糖。
 
3、標準品的品種、分子式及理論計算值見表2。
 
4、雙碟的制備： 取直徑約90mm，高16～17mm的平底雙碟，分別注入加熱融化的培養(yǎng)基（表1）20ml，使在碟底內(nèi)均勻攤布，放置水平臺面上使凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量加熱融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），加入規(guī)定的試驗菌懸液適量(能得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18～22mm，搖勻，在每1雙碟中分別加入5ml，使在底層上均勻攤布，作為菌層。放置在水平臺上冷卻后，在每1雙碟中以等距離均勻安置4個不銹鋼小管(內(nèi)徑為6.0mm±0.1mm，高為10.0mm±0.1mm，外徑為7.8mm±0.1mm)，用陶瓦圓蓋覆蓋備用。

5、取照上述方法制備的雙碟不得少于4個，在每1雙碟中對角的2個不銹鋼小管中分別滴裝高濃度及低濃度的標準品溶液，其余2個小管中分別滴裝相應的高低兩種濃度的供試品溶液；高、低濃度的劑距為2∶1或4∶1。
四、結果判定
將在規(guī)定條件下培養(yǎng)后的雙碟，放入菌落計數(shù)儀內(nèi)，啟動抑菌圈測定軟件，一鍵即可測量出各個抑菌圈直徑(或面積)，測量結果可以直接在屏幕顯示或傳輸?shù)紼XCEL文件。