ABDP 493/503中性脂滴熒光探針的原理機制及在科研疾病研究中的應用
ABDP 493/503是一種非常實用的中性脂滴熒光探針，它因其高選擇性、良好的光穩(wěn)定性和對pH不敏感的特性，成為脂代謝研究中的重要工具。
化學性質(zhì)化學名稱：4,4-二氟-1,3,5,7,8-五甲基-4-硼-3a,4a-二氮雜-s-吲哚烯 (4,4-Difluoro-1,3,5,7,8-pentamethyl-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene)。
CAS號：121207-31-6。
分子式：C₁₄H₁₇BF₂N₂。
分子量：262.1 g/mol。
純度：99%
廠商：AbMole
外觀與溶解性：通常為固體粉末。易溶于DMSO（例如可達19.08 mM），在水溶液中溶解度較低。配置溶液時可能需要加熱和超聲處理以助溶。
光譜性質(zhì)：最大激發(fā)波長 493 nm，最大發(fā)射波長 503 nm，發(fā)出明亮的綠色熒光。
穩(wěn)定性與儲存：固體粉末應在-20°C下避光保存，以避免熒光淬滅。配制成溶液后，建議分裝凍存，并避免反復凍融。
原理機制
ABDP 493/503是一種親脂性熒光染料。其工作原理基于其自身的疏水特性，能夠輕松穿過細胞膜，并特異性富集在細胞內(nèi)的中性脂質(zhì)中，主要是脂滴（Lipid Droplets）疏水的核心區(qū)域。
當染料進入脂滴的疏水環(huán)境后，其熒光強度會顯著增強。因此，在熒光顯微鏡下，可以看到脂滴發(fā)出明亮的綠色熒光。與尼羅紅（Nile Red）等其他親脂性染料相比，ABDP 493/503對環(huán)境的極性和pH值相對不敏感，在不同生理條件下能保持穩(wěn)定的熒光特性，因此具有更高的選擇性。
實驗應用脂滴標記與成像：可用于活細胞或固定細胞的脂滴標記，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡等多種成像平臺。它可以清晰顯示脂滴的大小、數(shù)量和分布。
流式細胞術分析：結合流式細胞術，能夠對細胞群體中脂滴的含量進行定量分析，用于研究細胞脂質(zhì)代謝狀態(tài)或分選特定類型的細胞。
肝脂肪變性研究：在肝臟研究中，該探針被用于評估高脂肪飲食誘導的肝脂肪變性動物模型，幫助區(qū)分微泡性和大泡性脂肪變性，為肝病研究提供重要工具。
脂滴動態(tài)過程研究：憑借其良好的光穩(wěn)定性和細胞相容性，ABDP 493/503還可用于研究活細胞中脂滴的形成、融合以及與其他細胞器的相互作用等動態(tài)過程。
使用建議與注意事項
工作液配置：通常先用DMSO配制1-5 mM的儲存液，使用時再用適當?shù)木彌_液（如PBS或無血清培養(yǎng)基）稀釋成1-5 μM的工作液。工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
染色步驟：對于貼壁細胞，棄去培養(yǎng)基后用PBS清洗，加入染料工作液覆蓋細胞，37°C避光孵育5-30分鐘。隨后去除染料工作液，用預溫的培養(yǎng)液或PBS清洗細胞2-3次后即可觀察。
設置對照：建議設置陽性對照（例如用油酸處理細胞以誘導脂滴生成）以確保染色效果。
避光操作：所有操作步驟應盡量避光進行，以減緩熒光淬滅。
圖像采集：使用FITC或GFP的濾光片設置進行圖像采集。
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