隨著2025年最新版《藥品注冊檢驗工作程序和技術要求規(guī)范(2025年修訂版)》的實施，細胞與基因治療（CGT）產(chǎn)品的商業(yè)化沖刺進入了全新階段。作為“活的藥物”，自體CAR-T產(chǎn)品的注冊檢驗（上市前的最后一道關鍵門檻）一直面臨著無據(jù)可依、流程卡殼的困境。

近日，《中國細胞生物學學報》發(fā)表了一篇來自中檢院發(fā)表的文章《CAR-T細胞治療產(chǎn)品上市前注冊檢驗的特殊要求及關注點》，該文章系統(tǒng)總結了10款產(chǎn)品（8款上市+2款NDA）的實際檢驗經(jīng)驗，是迄今最權威的“復盤報告”。本文我們將為您提煉其中的核心干貨，探討監(jiān)管視角下CAR-T注冊檢驗的難點與破局之道。

CAR-T 細胞治療產(chǎn)品注冊檢驗面臨的挑戰(zhàn)
與傳統(tǒng)大分子藥物（如單抗）成熟的生產(chǎn)模式不同，CAR-T產(chǎn)品的注冊檢驗面臨著先天性的基因限制�？偨Y下來：傳統(tǒng)大分子藥物單批次產(chǎn)量大（滿足成千上萬患者）、穩(wěn)定性好、有效期長（2-3年）；CAR-T細胞治療產(chǎn)品個體化生產(chǎn)、產(chǎn)量極低（無法按常規(guī)取樣原則取樣）、部分新鮮制劑有效期極短、產(chǎn)品異質性強，質量標準難以統(tǒng)一。
 

這就構成了注冊檢驗中時限與樣本量的極致博弈。尤其在首檢異常需復試的情況下，“備樣不足”或“備樣過期”問題會立刻凸顯，成為導致審評進程中斷的主要風險。

官方破局方案：合理設置取樣點和樣本量
● 過程樣 vs.終產(chǎn)品：以最適樣本為原則
支原體、牛血清白蛋白及抗生素殘留等項目可采用過程控制樣本外觀、細胞活率、表型及活性等檢測項目則可采用終產(chǎn)品樣本

● 健康供者樣：患者樣本不足時的合規(guī)備選
若患者來源的終產(chǎn)品樣本不可行，可采用至少3個不同健康供者來源的、經(jīng)商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的樣本進行檢驗，但需充分評估其代表性風險。

● 樣本包裝與復試的"底線思維”
為滿足復試要求，原則上應提供至少4個獨立包裝的樣品。若樣本量實在無法滿足，申請人需提交“不符合規(guī)定時不進行復試”的書面聲明，并優(yōu)先保證安全性項目的檢測。

避坑指南
針對質量標準及檢驗方法方面存在的問題, 中檢院共提出了175條復核意見。具體包括下述內容：
● 部分關鍵項目缺失：在病毒載體的質量標準中, 缺少生物學活性檢測項目。
● 項目名稱用詞不規(guī)范：“CAR陽性率”誤寫“感染效率”；“裝量”描述為“劑量”。
● 部分標準限度設定過低：生物活性、B細胞殘留項目問題突出。
● 方法附錄缺失/簡陋：未明確取樣量、流式檢測采集細胞數(shù)量。
● 方法驗證不充分：四參數(shù)模型未適用性驗證；RSD標準過寬≤50% vs 推薦≤25%；樣本選錯；主/雜質混同。

針對中檢院指出的CAR-T細胞治療產(chǎn)品注冊檢驗核心挑戰(zhàn)——即“個體化生產(chǎn)引發(fā)的樣本量稀缺、有效期緊迫的時空困境”，以及“質量標準科學性不足、方法開發(fā)嚴謹性欠缺、過程控制體系缺失”三大深層痛點——本文將結合ADAM系列熒光自動細胞計數(shù)儀與JuLI Stage活細胞成像分析系統(tǒng)的技術特點，從 “破解檢驗困境、支撐質量合規(guī)、保障數(shù)據(jù)可靠” 三個維度，系統(tǒng)闡述該一體化解決方案在CAR-T產(chǎn)品上市前注冊檢驗中的關鍵作用。

ADAM系列熒光自動細胞計數(shù)儀：攻克精準定量與合規(guī)性核心挑戰(zhàn)

ADAM系列針對CAR-T樣本珍貴、指標要求嚴苛的特點，在以下環(huán)節(jié)提供關鍵技術支撐：

破解“樣本量困境”，保障復試可行性
超微量檢測：僅需~15μL樣本即可完成活細胞/總細胞的高精度計數(shù)，極大節(jié)省珍貴的CAR-T終產(chǎn)品及過程樣本。這確保了在有限的樣本量下，既能完成多項關鍵指標（如活率、濃度）的檢測，又能為必需的復試留存足夠獨立包裝樣本，避免因樣本耗盡導致的審評延誤。

為“質量標準”提供可靠數(shù)據(jù)基石
高精度與重復性：針對T細胞/CAR-T細胞，提供CV≤5%的活率、濃度檢測精度，遠優(yōu)于人工計數(shù)。這為科學設定“終產(chǎn)品活率”、“CAR陽性細胞濃度”等關鍵質量標準的限度提供了可靠、一致的數(shù)據(jù)基礎，規(guī)避了因檢測誤差大導致的限度設定不合理風險。

熒光法定量：采用AO/DAPI等熒光染料，準確區(qū)分活死細胞，避免臺盼藍法等明場檢測對凋亡早期細胞、碎片等的誤判，結果更準確，符合藥典對方法準確性的要求。

強化“方法學控制”，滿足合規(guī)性質控
支持數(shù)據(jù)完整性：系統(tǒng)符合21 CFR Part 11等數(shù)據(jù)完整性要求，具備完整的審計追蹤、電子簽名等功能，為注冊申報提供可追溯的合規(guī)數(shù)據(jù)鏈。

確保操作安全與效率
快速高效：最快10s完成樣本檢測，快速響應工藝監(jiān)控與放行檢驗需求。

JuLI Stage活細胞成像分析系統(tǒng)：實現(xiàn)動態(tài)過程監(jiān)控與功能學洞察

JuLI Stage在CAR-T的工藝開發(fā)、質量控制及穩(wěn)定性研究中，提供了不可替代的動態(tài)、無損監(jiān)測能力：
全程“動態(tài)監(jiān)控”工藝過程與穩(wěn)定性
無損連續(xù)監(jiān)測：可在培養(yǎng)箱內對CAR-T細胞的擴增過程進行長達數(shù)天至數(shù)周的連續(xù)、自動成像與計數(shù)，實時繪制生長曲線，精準確定最佳收獲時間點，優(yōu)化工藝。

穩(wěn)定性研究支持：長期監(jiān)測終產(chǎn)品或中間品的細胞活率與形態(tài)變化，為確定有效期和儲存條件提供直接的動態(tài)數(shù)據(jù)支持，比終點法更具說服力。

提供“形態(tài)與功能”關聯(lián)信息
細胞形態(tài)學評估：實時觀察細胞聚集、增大、變形等形態(tài)變化，這些通常是細胞活性、活化狀態(tài)或應激反應的直觀指示，可作為工藝一致性評判的補充依據(jù)。

輔助功能學驗證：通過長時間動態(tài)成像，可定性甚至半定量地觀察CAR-T細胞與靶細胞的共培養(yǎng)情況，直觀評估其增殖、聚集及潛在的殺傷動力學，為功能效力研究提供視覺證據(jù)。

提升數(shù)據(jù)豐富度與說服力
可視化數(shù)據(jù)報告：提供帶時間戳的影像資料，使生長曲線、活率變化等數(shù)據(jù)更加直觀可信，在申報資料中增強關鍵結論的說服力。

單細胞水平分析：可在群體水平數(shù)據(jù)之外，提供單細胞行為的洞察，有助于深入理解產(chǎn)品的異質性和批次間一致性。

協(xié)同構建CAR-T注冊檢驗的完整證據(jù)鏈
在CAR-T產(chǎn)品的注冊檢驗中，ADAM系列與JuLI Stage形成了優(yōu)勢互補：

● ADAM系列熒光自動細胞計數(shù)儀確保了對細胞濃度、活率等關鍵放行指標進行合規(guī)、精準、可追溯的定量檢測，直接滿足藥典與質量標準對終產(chǎn)品及過程控制的要求。

● JuLI Stage活細胞成像分析系統(tǒng)則實現(xiàn)了對生產(chǎn)工藝過程、細胞生長動力學及穩(wěn)定性的動態(tài)、無損監(jiān)控，為工藝驗證、質量標準制定及產(chǎn)品特性研究提供了豐富的可視化數(shù)據(jù)與深入洞察。

兩者結合，共同為CAR-T從工藝開發(fā)、過程控制到終產(chǎn)品放行的全生命周期，提供了從“靜態(tài)精準數(shù)字”到“動態(tài)過程影像”的立體化數(shù)據(jù)支持，有力地幫助企業(yè)構建起堅實、完整、符合監(jiān)管要求的注冊檢驗證據(jù)鏈，顯著提升申報效率與成功率。