在蛋白純化過程中，樣品前處理通常是最容易忽略但也是非常重要的一環(huán)。一個(gè)成熟的樣品前處理方法，不僅能保護(hù)昂貴的層析柱，也能顯著提高純化的純度和效率。

以大腸桿菌體系表達(dá)重組標(biāo)簽蛋白純化為例，完整的樣品前處理過程應(yīng)該包括以下幾步：

1、菌體收獲
1.1收集菌體
操作：4℃、6000–8000 rpm 離心 10–15 min收集菌體，棄上清。
作用：獲得大量表達(dá)目標(biāo)蛋白的大腸桿菌

1.2洗滌
操作：用預(yù)冷 PBS 或結(jié)合緩沖液（Binding buffer） 重懸洗滌 1–2 次，離心棄上清。

2、細(xì)胞破碎
操作：使用加入蛋白酶抑制劑、EDTA（可選）、DTT（可選） 的結(jié)合緩沖液重懸沉淀。冰上超聲破碎（功率 30%–40%，超 3s 停 5s，總時(shí)間 10–20 min）。
作用：破碎菌體，釋放目標(biāo)蛋白

3、離心澄清
操作：4℃、12000–16000g 離心 20–30 min，取上清

4、樣品&緩沖液過濾
PART 1 緩沖液過濾
結(jié)合緩沖液和洗脫緩沖液一般都是使用自配體系，其質(zhì)量直接影響層析柱的壽命和純化效果。在使用之前，需要使用0.2μm 或者0.45μm濾器/濾膜進(jìn)行除菌和脫氣。
操作：將0.2 μm或0.45 μm孔徑的濾器放置在收集瓶口，啟動(dòng)真空泵對(duì)配制好的緩沖液進(jìn)行抽濾

作用：
1、去除緩沖液中可能存在的細(xì)菌和微小顆粒，防止它們堵塞層析柱，保護(hù)柱床和系統(tǒng)管路；防止細(xì)菌進(jìn)入層析柱和系統(tǒng)管路造成污染；
2、去除緩沖液中的氣體，避免在層析系統(tǒng)中產(chǎn)生氣泡，影響紫外檢測的準(zhǔn)確性。防止氣泡進(jìn)入層析柱影響層析效果。

PART 2 樣品過濾
細(xì)胞破碎和離心后，樣品中仍然含有少量細(xì)胞碎片、核酸、不溶性蛋白等雜質(zhì)，如果直接上樣，會(huì)堵塞和損傷層析柱。因此需要預(yù)先使用0.2μm 或者0.45μm濾器/濾膜進(jìn)行過濾。

操作：
1、準(zhǔn)備一個(gè)干凈的收集管。
2、將離心后的上清液用注射器吸入，安裝上針頭濾器，緩慢推注過濾，收集過濾液。

作用：
低蛋白吸附濾器能夠去除樣品中的雜質(zhì)，避免堵塞層析柱和系統(tǒng)，同時(shí)也能盡量減少目標(biāo)蛋白在過濾過程中的損失，保證回收率。

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