本文來源于微信公眾：Bloki 作者：Bloki

周末愉快，分享一篇病毒載體in vivo CAR-T的Nature主刊，具體內(nèi)容如下：

病毒載體in vivo CAR-T一大問題在于CAR序列隨機(jī)整合進(jìn)基因組帶來的風(fēng)險，作者計劃用雙病毒載體策略：EDV遞送切開T細(xì)胞TRAC位點(diǎn)的RNP（CRISPR Cas9+sgRNA），AAV遞送含CAR基因的同源介導(dǎo)修復(fù)HDR模版，EDV+AAV實(shí)現(xiàn)把CAR基因定點(diǎn)整合到TRAC的目的（HDR介導(dǎo)定點(diǎn)整合的文章非病毒定點(diǎn)整合制備CAR-T、T細(xì)胞靶向AAV的文章篩選用于T細(xì)胞基因編輯的AAV我們都整理分享過）

遞送RNP（CRISPR Cas9+sgRNA）的EDV可以“干掉”TCR

EDV+AAV干掉TCR，介導(dǎo)CAR表達(dá)（右下象限）

DNA-PK抑制劑M3814（可抑制DNA修復(fù)中的非同源末端連接NHEJ，NHEJ會干擾同源介導(dǎo)修復(fù)HDR）促進(jìn)EDV+AAV干掉TCR、介導(dǎo)CAR表達(dá)

NSG小鼠注射人PBMC構(gòu)建人源化小鼠，體內(nèi)，EDV+AAV介導(dǎo)靶向CD19的CAR表達(dá)，干掉B細(xì)胞

當(dāng)人源化小鼠MHC缺陷，EDV+AAV介導(dǎo)靶向CD19的CAR表達(dá)、干掉B細(xì)胞的作用受限，暗示載體表達(dá)依賴小鼠MHC對T細(xì)胞的調(diào)動作用

優(yōu)化AAV：AAV+人T細(xì)胞+人血清（血清內(nèi)含中和AAV的抗體）共培養(yǎng)后，測序T細(xì)胞，篩選挖掘可抵抗中和的AAV，篩到了AAV-hT7

人血清HS影響AAV6遞送效率，但篩到的AAV-hT7可抵抗人血清中的中和抗體（SF無血清）

篩AAV貨物表達(dá)依賴T細(xì)胞上什么蛋白

遞送GFP，篩到的AAV-hT7介導(dǎo)T細(xì)胞表達(dá)除了依賴AAVR、SLC35B2外，還依賴CD7（分享過CD7文章CD7靶向LNP體內(nèi)高效制備CAR-T）

優(yōu)化EDV：突變VSVG，使其不與LDLR互作，加CD3靶向；新的EDV搭配AAV選擇性介導(dǎo)T細(xì)胞表達(dá)貨物GFP（其他細(xì)胞表達(dá)低）

新的EDV可介導(dǎo)T細(xì)胞激活

優(yōu)化出的EDV+AAV體外干掉TCR、介導(dǎo)CAR表達(dá)

體內(nèi)驗證病毒載體組合，anti-CD3 EDV+AAV-hT7在人源化小鼠體內(nèi)不依賴MHC的高效干掉TCR、介導(dǎo)CAR表達(dá)

anti-CD3 EDV+AAV-hT7在人源化小鼠體內(nèi)高效干掉B細(xì)胞

CAR表達(dá)影響T細(xì)胞表型（EGFRt+指示CAR表達(dá)）

anti-CD3 EDV+AAV-hT7遞送CAR，抑瘤（1XX CAR-T的文章【CNS文獻(xiàn)分享】只有1個ITAM的CD3ζ信號段對CAR-T更好我們分享過）

作者的AAV/EDV雙載體in vivo CAR-T療效優(yōu)于傳統(tǒng)的ex vivo CAR-T（LVV指示隨機(jī)整合，TRAC指示定點(diǎn)整合）

作者的AAV/EDV雙載體in vivo CAR-T增殖更優(yōu)

定點(diǎn)整合利好CAR表達(dá)（TRAC指示定點(diǎn)整合）

兩個靶點(diǎn)不同的腫瘤模型上，AAV/EDV雙載體in vivo CAR-T抑瘤
帥氣的病毒in vivo CAR-T玩法，定點(diǎn)整合好。