核心研究方法
在實驗方面，本研究結合了單細胞測序（scRNA-seq）、單細胞TCR/BCR測序（scTCR/BCR-seq）、空間轉錄組（10x Genomics Visium HD）、多重免疫熒光（mIF）及體內(nèi)外功能實驗等多種技術，采用“臨床樣本檢測→單細胞解析→分子機制驗證→體內(nèi)外功能驗證”的研究思路。

文章詳解
1. 研究設計與樣本特征
研究納入28例來自上海瑞金醫(yī)院的晚期PDAC患者，均接受AG化療，無既往化療或靶向治療史。采集36份腫瘤活檢樣本（23份化療前、13份化療后，含8對匹配樣本）和24份配對PBMC樣本，通過RECIST 1.1標準評估化療療效：11例（39.3%）為響應者（部分緩解PR），13例（46.4%）為非響應者（疾病進展PD），4例（14.3%）為穩(wěn)定疾病（SD）。

研究設計與樣本特征

2. 化療對TME的動態(tài)重塑
通過單細胞測序共鑒定出19種主要細胞類型（包括腫瘤細胞、免疫細胞、基質細胞等），共120,353個腫瘤細胞和174,141個PBMC細胞。核心發(fā)現(xiàn)：① 響應者化療后，惡性細胞和巨噬細胞比例顯著下降，經(jīng)典樹突狀細胞（cDCs）比例升高；② 非響應者化療后，T/NK細胞比例顯著下降，中性粒細胞比例升高；③ 外周血中，響應者和非響應者的增殖性T細胞比例均升高，提示化療可廣泛激活外周T細胞，但T細胞的功能分化存在差異。
 

PDAC 化療后配對活檢中 TME 重塑的特征分析

3. 腫瘤細胞可塑性與化療響應的關聯(lián)
鑒定出6種腫瘤細胞亞群：3種經(jīng)典型（FABP1⁺、SPINK4⁺、GPX2⁺）、1種基底樣型（SNCG⁺）、1種增殖型（MKI67⁺）、1種中間共表達型（LMO7⁺）。核心發(fā)現(xiàn)：① RNA velocity分析顯示，LMO7⁺中間型細胞可雙向轉換為經(jīng)典型或基底樣型；② 化療前，響應者中GPX2⁺經(jīng)典型細胞比例更高，非響應者中SNCG⁺基底樣型細胞比例更高；③ 化療后，響應者腫瘤細胞向經(jīng)典型轉換，非響應者向基底樣型轉換，且非響應者的惡性細胞總數(shù)增加144.01%，響應者減少至預處理水平的28.16%

化療療效相關的惡性細胞轉化

4. 巨噬細胞亞型與化療耐藥的關聯(lián)
鑒定出6種巨噬細胞亞型（IL1B⁺、ISG15⁺、MARCO⁺、SPP1⁺、FOLR2⁺、ALDH1A1⁺），其中SPP1⁺ TAMs與化療耐藥密切相關，F(xiàn)OLR2⁺ Trms與化療敏感相關。核心發(fā)現(xiàn)：① 與正常胰腺組織相比，PDAC組織中SPP1⁺ TAMs增多、FOLR2⁺ Trms減少；② 化療后，響應者中FOLR2⁺ Trms顯著增加、SPP1⁺ TAMs減少，非響應者則維持高比例SPP1⁺ TAMs；③ 配體-受體分析顯示，SPP1⁺ TAMs與SNCG⁺基底樣細胞通過MMP9-CDH1、VEGFA-AXL等通路相互作用，促進耐藥；FOLR2⁺ Trms與GPX2⁺經(jīng)典型細胞通過TNF-TNFRSF21等通路相互作用，增強化療敏感性。
 

巨噬細胞亞型與化療耐藥的關聯(lián)

5. CD8⁺ T細胞耗竭與化療耐藥的關聯(lián)
鑒定出多種CD8⁺ T細胞亞群，包括耗竭型T細胞（Tex，分為GZMK⁺過渡耗竭型和終末耗竭型）、組織駐留記憶T細胞（Trm）、終末分化效應記憶T細胞（Temra）等。核心發(fā)現(xiàn)：① 化療后，非響應者中GZMK⁺過渡耗竭型T細胞、終末耗竭型T細胞比例顯著升高，響應者中Trm和Temra比例升高；② 響應者的Temra細胞出現(xiàn)克隆擴增，且新增T細胞克隆以細胞毒性Temra為主，提示化療可誘導新的抗腫瘤T細胞應答；③ 非響應者中，CD8⁺ T細胞的耗竭評分升高、細胞毒性評分降低，且GZMK⁺過渡耗竭型T細胞可能成為免疫檢查點阻斷（ICB）的潛在靶點。

CD8⁺ T細胞耗竭與化療耐藥的關聯(lián)

6. CD276/B7-H3的雙重調控作用及靶向價值
CD276/B7-H3在SNCG⁺基底樣細胞和LMO7⁺中間型細胞中高表達，且在非響應者中表達顯著高于響應者，化療后表達進一步升高。核心發(fā)現(xiàn)：① 體內(nèi)外實驗證實，敲低/敲除CD276可促進腫瘤細胞向經(jīng)典型轉換，抑制基底樣型標志物表達；② 靶向CD276可增強CD8⁺ T細胞的細胞毒性，減少T細胞耗竭，降低SPP1⁺ TAMs的血管生成能力；③ 動物實驗中，CD276抑制劑聯(lián)合AG化療可顯著抑制腫瘤生長，延長KPC小鼠的生存期，且無明顯毒性。

靶向治療 PDAC 中CD276/B7-H3逆轉化療耐藥性

研究結論
本研究通過單細胞測序等技術，首次揭示了PDAC化療過程中腫瘤細胞可塑性與TME重塑的動態(tài)規(guī)律，明確了“SPP1⁺ TAMs-SNCG⁺基底樣細胞-耗竭型T細胞”構成的化療耐藥微環(huán)境，證實CD276/B7-H3是調控這一微環(huán)境的關鍵分子，為晚期PDAC的化療聯(lián)合靶向治療提供了全新靶點和理論依據(jù)。

參考文獻：
【1】Zhang Y, Du Y, Wang J., et al. Single-Cell Analysis of Chemotherapy-induced Remodeling Reveals CD276-driven Basal-like Chemoresistance in Pancreatic Cancer. Gastroenterology. 2026 Feb 17:S0016-5085(25)06097-4. doi: 10.1053/j.gastro.2025.09.04