LEGENDplex多因子檢測與HTRF/Alpha高通量技術(shù)結(jié)合助力創(chuàng)新藥研發(fā)
LEGENDplex與HTRF/Alpha雙劍合璧，賦能創(chuàng)新藥研發(fā)細(xì)胞因子檢測全場景
在創(chuàng)新藥研發(fā)的全生命周期中——無論是抗體藥物、小分子抑制劑還是細(xì)胞療法，細(xì)胞因子作為免疫細(xì)胞受激后的核心信號分子，其爆發(fā)式釋放往往標(biāo)志著藥物觸發(fā)了關(guān)鍵的免疫應(yīng)答或毒性反應(yīng)。因此，對細(xì)胞因子產(chǎn)生機(jī)制的精準(zhǔn)解析與信號通路的高效篩選，始終是評估藥物有效性與安全性的命脈。而經(jīng)典ELISA技術(shù)受限于耗時(shí)久、通量低及高樣本消耗等瓶頸，已難以滿足藥物研發(fā)中海量樣品與多指標(biāo)篩選的高效需求。
為提升研發(fā)效率，針對“多因子檢測”與“高通量藥效評價(jià)”這兩大核心場景，LEGENDplex多因子檢測與HTRF/Alpha高通量技術(shù)提供了完美的互補(bǔ)方案。下文將結(jié)合兩大標(biāo)桿案例進(jìn)行實(shí)戰(zhàn)演練，讓我們透過這些真實(shí)應(yīng)用，見證LEGENDplex+HTRF/ALPHA如何賦能創(chuàng)新藥研發(fā)的生命周期。
| 檢測技術(shù) | 多因子檢測 | 單因子高通量檢測 | |
| 產(chǎn)品圖片 |  |
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| 特性 | LEGENDplex 流式微球 |
HTRF 均相時(shí)間分辨熒光 |
Alpha 放大的發(fā)光鄰近檢測 |
| 核心技術(shù) | 編碼微球+流式細(xì)胞術(shù) | 鑭系元素穴狀化合物+時(shí)間分辨-熒光共振能量轉(zhuǎn)移 | 供體/受體微球+單線態(tài)氧 |
| 檢測類型 | 多重檢測 (1~14種/孔) |
單重檢測 | 單重或雙重檢測 |
| 檢測 指標(biāo)類型 |
細(xì)胞因子（白介素、趨化因子、生長因子、干擾素）、免疫球蛋白、神經(jīng)標(biāo)志物、激素 | 細(xì)胞因子（白介素、趨化因子、生長因子、干擾素）、免疫球蛋白、第二信使、神經(jīng)標(biāo)志物、信號通路蛋白等 | 細(xì)胞因子（白介素、趨化因子、生長因子、干擾素）、免疫球蛋白、第二信使、神經(jīng)標(biāo)志物、信號通路蛋白等 |
| 樣品量 | 12.5ul/25ul | ≤16ul | ≤5ul |
| 檢測種屬 | Human/Mouse /Rat/NHP |
Human/Mouse /Rat/NHP |
Human/Mouse /Rat/NHP |
| 操作流程 | 需洗滌 | 免洗(均相)，實(shí)驗(yàn)操作可控制在2h | 免洗(均相)，實(shí)驗(yàn)操作可控制在2h |
| 自動(dòng)化 程度 |
中等 | 高(適合HTS) | 高(適合HTS) |
| 主要設(shè)備 | 流式細(xì)胞儀 | 多功能酶標(biāo)儀 (TRF模塊) |
多功能酶標(biāo)儀 (Alpha模塊) |
| 靈敏度 | 高(pg/mL級別) | 高(pg/mL級別) | 高(低至fg/ml級別) |
| 抗干擾性 | 強(qiáng) | 較強(qiáng)(時(shí)間分辨消除背景) | 強(qiáng)(光化學(xué)機(jī)制) |
多指標(biāo)同步檢測的LEGENDplex，及其在安全性評估的應(yīng)用
LEGENDplex是基于流式平臺的多因子檢測方法，通過在不同大小及帶有不同強(qiáng)度APC熒光的微球上偶聯(lián)不同的捕獲抗體，實(shí)現(xiàn)對特定靶標(biāo)蛋白的捕獲，通過檢測抗體和PE通道實(shí)現(xiàn)信號檢測。
使用LEGEDNplex利用不同大小的微球以及微球上不同熒光強(qiáng)度的APC，巧妙地實(shí)現(xiàn)14種不同指標(biāo)同時(shí)檢測。同時(shí)，對于樣品的體積要求大大降低。一份珍貴樣品，僅需最低12.5ul，便可進(jìn)行14種不同指標(biāo)的同時(shí)檢測，相比ELISA檢測效率提升十倍以上。
多因子檢測實(shí)戰(zhàn)：短期CAR-T療法安全性評估，精準(zhǔn)預(yù)警細(xì)胞因子風(fēng)暴
細(xì)胞因子風(fēng)暴/細(xì)胞因子釋放綜合征是CAR-T常見的副作用之一，由免疫系統(tǒng)過度激活引起，多種細(xì)胞因子出現(xiàn)異常高表達(dá)。輕癥表現(xiàn)為高燒乏力惡心或者嘔吐，嚴(yán)重時(shí)可能出現(xiàn)血壓嚴(yán)重下降、呼吸困難甚至器官功能衰竭。為了提高患者的可及性和提高細(xì)胞制備效率，短期CAR-T細(xì)胞療法（short termCAR-T，即在載體暴露后僅24小時(shí)即進(jìn)行治療）成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。Arezoo等[i]發(fā)現(xiàn)，相比于傳統(tǒng)制備的CAR-T細(xì)胞，stCAR-T細(xì)胞展現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞因子風(fēng)暴（figure4C&D）。
同時(shí)對多種細(xì)胞因子的檢測，對于ELISA而言極具挑戰(zhàn)性。而多因子檢測的LEGENDplex可以從容地同步檢測IL-6，IFN-γ，TNF-α，GM-CSF，IL-2，IL-10，MCP-1等多種不同細(xì)胞來源的細(xì)胞因子，從單份樣品中獲得更豐富的信息，實(shí)現(xiàn)了對細(xì)胞因子風(fēng)暴的高效監(jiān)測。
免洗高通量的HTRF/Alpha技術(shù)，及其在藥效評價(jià)中的應(yīng)用
針對炎癥性疾病與腫瘤免疫微環(huán)境等高頻研發(fā)場景，HTRF/Alpha細(xì)胞因子檢測試劑盒憑借五大核心優(yōu)勢，確立了其作為新藥研發(fā)‘不二之選’的地位。
對于追求極致效率的藥企及CDMO/CRO伙伴而言，這不僅是獲取數(shù)據(jù)的工具，更是在最短時(shí)間內(nèi)交付高質(zhì)量決策依據(jù)的‘加速器’。諾華（Novartis）口服TLR7/8抑制劑MHV370的成功推進(jìn)便是最佳佐證：該技術(shù)如何助力其高效完成關(guān)鍵藥效評價(jià)，并以前所未有的速度推動(dòng)藥物從臨床前研究邁向臨床II期？
單因子高通量實(shí)戰(zhàn)：諾華MHV370藥效評估，HTRF/Alpha細(xì)胞因子護(hù)航邁入臨床II期
在紅斑狼瘡研發(fā)領(lǐng)域，TLR7/8的異常激活被視為核心致病驅(qū)動(dòng)。諾華[ii]在頂級期刊《Cell Reports Medicine》發(fā)表重磅研究，詳細(xì)揭示了口服TLR7/8小分子抑制劑MHV370的臨床前特性。面對海量的化合物篩選及體外藥效驗(yàn)證的需求，HTRF及AlphaLISA均相免洗技術(shù)可將復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)流程壓縮至2小時(shí)以內(nèi)，并兼容96/384/1536孔高通量自動(dòng)化篩選。憑借快速高通量優(yōu)勢，諾華團(tuán)隊(duì)迅速驗(yàn)證了MHV370對TLR7/8通路激活的強(qiáng)效抑制作用，并精準(zhǔn)捕捉到下游細(xì)胞因子水平的顯著變化。數(shù)據(jù)顯示，MHV370在體外強(qiáng)效抑制了由ssRNA驅(qū)動(dòng)的IFN-α（AlphaLISA）、CXCL10（AlphaLISA）、TNF-α（HTRF）、及IL-6（HTRF）等多種細(xì)胞因子產(chǎn)生。上述扎實(shí)可靠的研究結(jié)果為MHV370推進(jìn)至II期臨床試驗(yàn)提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)支撐。
雙劍合璧，共筑新藥研發(fā)加速引擎
從LEGENDplex以微量樣本洞察細(xì)胞因子風(fēng)暴的“全景圖譜”，到HTRF/Alpha以均相免洗技術(shù)實(shí)現(xiàn)藥效評價(jià)的“極速突圍”，這兩項(xiàng)技術(shù)是創(chuàng)新藥研發(fā)生命周期中互為補(bǔ)充的“雙劍”。前者為安全性評估提供了不可或缺的深度與廣度，后者為早期藥物發(fā)現(xiàn)注入了驚人的速度與效率。
在抗體藥、小分子抑制劑及細(xì)胞療法競相角逐的今天，選擇匹配的檢測策略，意味著更短的研發(fā)周期、更低的試錯(cuò)成本以及更高的成功概率。未來，瑞孚迪（Revvity）將繼續(xù)深耕細(xì)胞因子檢測領(lǐng)域，提供更多元化、更精準(zhǔn)的應(yīng)用方案，助力全球藥企與科研機(jī)構(gòu)在創(chuàng)新藥的競速場上，以更敏銳的洞察力和更高效的執(zhí)行力，加速良藥問世，造福人類健康。
參考文獻(xiàn)
[i] Jamali A, etal. Early induction of cytokine release syndrome by rapidly generated CAR T cells in preclinical models. EMBO Mol Med. 2024 Apr;16(4):784-804. doi: 10.1038/s44321-024-00055-9.
[ii] Hawtin S, etal. Preclinical characterization of the Toll-like receptor 7/8 antagonist MHV370 for lupus therapy. Cell Rep Med. 2023 May 16;4(5):101036. doi: 10.1016/j.xcrm.2023.101036.
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