核心研究方法
在實(shí)驗(yàn)方面，本研究結(jié)合了單細(xì)胞測序（scRNA-seq）、單細(xì)胞TCR/BCR測序（scTCR/BCR-seq）、空間轉(zhuǎn)錄組（10x Genomics Visium HD）、多重免疫熒光（mIF）及體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)等多種技術(shù)，采用“臨床樣本檢測→單細(xì)胞解析→分子機(jī)制驗(yàn)證→體內(nèi)外功能驗(yàn)證”的研究思路。

文章詳解
1. 研究設(shè)計(jì)與樣本特征
研究納入28例來自上海瑞金醫(yī)院的晚期PDAC患者，均接受AG化療，無既往化療或靶向治療史。采集36份腫瘤活檢樣本（23份化療前、13份化療后，含8對匹配樣本）和24份配對PBMC樣本，通過RECIST 1.1標(biāo)準(zhǔn)評估化療療效：11例（39.3%）為響應(yīng)者（部分緩解PR），13例（46.4%）為非響應(yīng)者（疾病進(jìn)展PD），4例（14.3%）為穩(wěn)定疾�。⊿D）。

研究設(shè)計(jì)與樣本特征

2. 化療對TME的動態(tài)重塑
通過單細(xì)胞測序共鑒定出19種主要細(xì)胞類型（包括腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞等），共120,353個腫瘤細(xì)胞和174,141個PBMC細(xì)胞。核心發(fā)現(xiàn)：① 響應(yīng)者化療后，惡性細(xì)胞和巨噬細(xì)胞比例顯著下降，經(jīng)典樹突狀細(xì)胞（cDCs）比例升高；② 非響應(yīng)者化療后，T/NK細(xì)胞比例顯著下降，中性粒細(xì)胞比例升高；③ 外周血中，響應(yīng)者和非響應(yīng)者的增殖性T細(xì)胞比例均升高，提示化療可廣泛激活外周T細(xì)胞，但T細(xì)胞的功能分化存在差異。
 

PDAC 化療后配對活檢中 TME 重塑的特征分析

3. 腫瘤細(xì)胞可塑性與化療響應(yīng)的關(guān)聯(lián)
鑒定出6種腫瘤細(xì)胞亞群：3種經(jīng)典型（FABP1⁺、SPINK4⁺、GPX2⁺）、1種基底樣型（SNCG⁺）、1種增殖型（MKI67⁺）、1種中間共表達(dá)型（LMO7⁺）。核心發(fā)現(xiàn)：① RNA velocity分析顯示，LMO7⁺中間型細(xì)胞可雙向轉(zhuǎn)換為經(jīng)典型或基底樣型；② 化療前，響應(yīng)者中GPX2⁺經(jīng)典型細(xì)胞比例更高，非響應(yīng)者中SNCG⁺基底樣型細(xì)胞比例更高；③ 化療后，響應(yīng)者腫瘤細(xì)胞向經(jīng)典型轉(zhuǎn)換，非響應(yīng)者向基底樣型轉(zhuǎn)換，且非響應(yīng)者的惡性細(xì)胞總數(shù)增加144.01%，響應(yīng)者減少至預(yù)處理水平的28.16%

化療療效相關(guān)的惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)化

4. 巨噬細(xì)胞亞型與化療耐藥的關(guān)聯(lián)
鑒定出6種巨噬細(xì)胞亞型（IL1B⁺、ISG15⁺、MARCO⁺、SPP1⁺、FOLR2⁺、ALDH1A1⁺），其中SPP1⁺ TAMs與化療耐藥密切相關(guān)，F(xiàn)OLR2⁺ Trms與化療敏感相關(guān)。核心發(fā)現(xiàn)：① 與正常胰腺組織相比，PDAC組織中SPP1⁺ TAMs增多、FOLR2⁺ Trms減少；② 化療后，響應(yīng)者中FOLR2⁺ Trms顯著增加、SPP1⁺ TAMs減少，非響應(yīng)者則維持高比例SPP1⁺ TAMs；③ 配體-受體分析顯示，SPP1⁺ TAMs與SNCG⁺基底樣細(xì)胞通過MMP9-CDH1、VEGFA-AXL等通路相互作用，促進(jìn)耐藥；FOLR2⁺ Trms與GPX2⁺經(jīng)典型細(xì)胞通過TNF-TNFRSF21等通路相互作用，增強(qiáng)化療敏感性。
 

巨噬細(xì)胞亞型與化療耐藥的關(guān)聯(lián)

5. CD8⁺ T細(xì)胞耗竭與化療耐藥的關(guān)聯(lián)
鑒定出多種CD8⁺ T細(xì)胞亞群，包括耗竭型T細(xì)胞（Tex，分為GZMK⁺過渡耗竭型和終末耗竭型）、組織駐留記憶T細(xì)胞（Trm）、終末分化效應(yīng)記憶T細(xì)胞（Temra）等。核心發(fā)現(xiàn)：① 化療后，非響應(yīng)者中GZMK⁺過渡耗竭型T細(xì)胞、終末耗竭型T細(xì)胞比例顯著升高，響應(yīng)者中Trm和Temra比例升高；② 響應(yīng)者的Temra細(xì)胞出現(xiàn)克隆擴(kuò)增，且新增T細(xì)胞克隆以細(xì)胞毒性Temra為主，提示化療可誘導(dǎo)新的抗腫瘤T細(xì)胞應(yīng)答；③ 非響應(yīng)者中，CD8⁺ T細(xì)胞的耗竭評分升高、細(xì)胞毒性評分降低，且GZMK⁺過渡耗竭型T細(xì)胞可能成為免疫檢查點(diǎn)阻斷（ICB）的潛在靶點(diǎn)。

CD8⁺ T細(xì)胞耗竭與化療耐藥的關(guān)聯(lián)

6. CD276/B7-H3的雙重調(diào)控作用及靶向價值
CD276/B7-H3在SNCG⁺基底樣細(xì)胞和LMO7⁺中間型細(xì)胞中高表達(dá)，且在非響應(yīng)者中表達(dá)顯著高于響應(yīng)者，化療后表達(dá)進(jìn)一步升高。核心發(fā)現(xiàn)：① 體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，敲低/敲除CD276可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向經(jīng)典型轉(zhuǎn)換，抑制基底樣型標(biāo)志物表達(dá)；② 靶向CD276可增強(qiáng)CD8⁺ T細(xì)胞的細(xì)胞毒性，減少T細(xì)胞耗竭，降低SPP1⁺ TAMs的血管生成能力；③ 動物實(shí)驗(yàn)中，CD276抑制劑聯(lián)合AG化療可顯著抑制腫瘤生長，延長KPC小鼠的生存期，且無明顯毒性。

靶向治療 PDAC 中CD276/B7-H3逆轉(zhuǎn)化療耐藥性

研究結(jié)論
本研究通過單細(xì)胞測序等技術(shù)，首次揭示了PDAC化療過程中腫瘤細(xì)胞可塑性與TME重塑的動態(tài)規(guī)律，明確了“SPP1⁺ TAMs-SNCG⁺基底樣細(xì)胞-耗竭型T細(xì)胞”構(gòu)成的化療耐藥微環(huán)境，證實(shí)CD276/B7-H3是調(diào)控這一微環(huán)境的關(guān)鍵分子，為晚期PDAC的化療聯(lián)合靶向治療提供了全新靶點(diǎn)和理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：
【1】Zhang Y, Du Y, Wang J., et al. Single-Cell Analysis of Chemotherapy-induced Remodeling Reveals CD276-driven Basal-like Chemoresistance in Pancreatic Cancer. Gastroenterology. 2026 Feb 17:S0016-5085(25)06097-4. doi: 10.1053/j.gastro.2025.09.04