工具mRNA的分類及選擇指南
技術(shù)的狂奔離不開扎實的工具支撐。那么什么是工具mRNA?
簡單說，它就是經(jīng)過標準化制備、可直接上手的成品mRNA——跟分子實驗里買來就能用的質(zhì)粒一樣，開箱即轉(zhuǎn)染，無需自己體外轉(zhuǎn)錄、加帽、修飾。你只需要把它遞送進細胞，它就開始翻譯蛋白。無論是驗證基因編輯效率、測試遞送載體，還是做活體成像示蹤，拿它直接開工就行。
愛必信提供兩大系列成品工具mRNA：
線性mRNA系列：采用化學合成Cap1帽結(jié)構(gòu)，搭配5種修飾堿基可選（如N1-Methylpseudo-UTP），密碼子、UTR和polyA結(jié)構(gòu)均針對哺乳動物細胞深度優(yōu)化密碼子、UTR與polyA結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性和翻譯效率雙高。
環(huán)狀mRNA系列（Endless類）：經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄、環(huán)化與嚴格純化，無游離末端，天然抵抗核酸酶降解，滿足長效表達的進階研究需求。
下面這張清單，幫你理清每一款的真正用途——別買錯。
一、工具線性mRNA —— 經(jīng)典、高效、即刻表達
線性mRNA是當前應(yīng)用最廣泛的形式。愛必信提供多種修飾堿基可選，您可以根據(jù)實驗對免疫原性、翻譯效率的偏好靈活選擇。按功能分為以下三類：
1,報告基因類：用于轉(zhuǎn)染效率驗證、LNP篩選與活體成像
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
核心用途 |
應(yīng)用場景 |
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EGFP mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug |
綠色熒光示蹤 |
優(yōu)化轉(zhuǎn)染體系、活細胞成像、遞送效率測試 |
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Fluc mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug |
熒光素酶定量報告 |
活體成像、藥物篩選、啟動子活性分析 |
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Fluc mRNA(Cy5) |
100ug |
熒光標記+定量 |
在Fluc功能基礎(chǔ)上，用Cy5追蹤mRNA的入胞和胞內(nèi)分布 |
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mcherry mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug |
紅色熒光示蹤 |
與EGFP雙色標記，或用于共定位研究 |
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tdTomato mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug |
長期熒光追蹤 |
亮度高、光穩(wěn)定，適合神經(jīng)元標記或細胞譜系示蹤 |
實驗案例1：
用核酸轉(zhuǎn)染試劑盒(abs60259)轉(zhuǎn)染mCherry mRNA至HEK293細胞24h、48h，在熒光顯微鏡下觀察到的紅色熒光穩(wěn)定且信號強。（具體實驗操作可參考核酸轉(zhuǎn)染試劑盒(abs60259)實驗操作步驟）
實驗案例2
用mRNA轉(zhuǎn)染試劑(abs60339)在不同類型細胞中轉(zhuǎn)染線性工具mRNA—EGFP mRNA，處理細胞24h后利用熒光顯微鏡拍照，各種細胞都呈現(xiàn)較強的綠色熒光。
實驗案例3
注射線性Luciferase mRNA至活體小鼠體內(nèi)，活體成像結(jié)果如圖所示：
2. 基因編輯類：用于CRISPR敲除/敲入與條件性基因重組
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
核心用途 |
應(yīng)用場景 |
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Cas9 mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug |
CRISPR基因編輯 |
與sgRNA共轉(zhuǎn)染，實現(xiàn)基因敲除/敲入，無需構(gòu)建Cas9穩(wěn)定細胞系 |
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Cre mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug |
基因重組 |
轉(zhuǎn)染含loxP位點的細胞/組織，實現(xiàn)條件性敲除/激活 |
3、抗原與蛋白表達類：用于免疫學研究與蛋白替代模型
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
核心用途 |
應(yīng)用場景 |
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OVA mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug |
模式抗原 |
T細胞活化、抗原呈遞、腫瘤疫苗體外模型 |
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EPO mRNA(N1-Methylpseudo-UTP) |
100ug/500ug/1mg |
蛋白表達模型 |
誘導紅細胞生成、模擬貧血、蛋白替代療法體外驗證 |
*若無特殊需求，一般選擇N1-Methylpseudo-UTP修飾，降低mRNA免疫原性。
二、工具環(huán)狀mRNA（Endless系列）：長效表達，持久作戰(zhàn)環(huán)狀mRNA沒有游離末端，抗降解能力極強，半衰期遠長于線性mRNA，適合需要持續(xù)數(shù)天甚至數(shù)周蛋白表達的實驗。
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
核心用途 |
應(yīng)用場景 |
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Endless Fluc mRNA |
100ug |
長效定量報告 |
體內(nèi)發(fā)光信號持續(xù)時間顯著延長，適合慢性病模型中的長期藥效評估 |
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Endless eGFP mRNA |
100ug |
長效綠色示蹤 |
構(gòu)建穩(wěn)定表達GFP的細胞模型，無需整合基因組，無插入突變風險 |
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Endless mcherry mRNA |
100ug |
長效紅色示蹤 |
長期細胞譜系追蹤、器官移植后細胞命運觀察 |
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Endless EPO mRNA |
100ug |
長效蛋白表達 |
慢性貧血、腎功能衰竭等需要長期蛋白補充的治療模型 |
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Endless Cas9 mRNA |
100ug |
長效基因編輯 |
持續(xù)供應(yīng)Cas9，適合體內(nèi)長效編輯或需要寬編輯窗口的復雜體系 |
從線性到環(huán)狀，從Cas9到Fluc，從EGFP到EPO——愛必信的13款成品工具mRNA覆蓋了報告基因、基因編輯、抗原呈遞、蛋白替代等主流應(yīng)用場景。選對工具，實驗就成功了一半。
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