基礎(chǔ)科研和高通量藥物篩選常用檢測體系優(yōu)化，pH值是其中一個至關(guān)重要的影響因素。常見的生物酶活性，蛋白結(jié)構(gòu)，結(jié)合動力學(xué)等生化分子反應(yīng)均受反應(yīng)體系的p H值影響。 因此，pH的精確測定對于體系優(yōu)化等日常實(shí)驗(yàn)尤為重要。然而，常用的傳統(tǒng)電極測定法，因其操作過程繁瑣（包括校正，沖洗，測定，沖洗等），大大限制了高通量樣品pH測定過程。

對此，近期德國BMG公司利用其專利的超快速全光譜檢測酶標(biāo)儀（SPECTROstar Nano）和美國Hudson Robotics Inc公司全自動移液工作站（SOLO自動移液器，Micro 10X分液器以及PlateCrane EX Robotic Arm高通量機(jī)械）開發(fā)出高通量自動化pH檢測方案（圖1）。


該方案利用pH指示劑溴百里香酚藍(lán)在不同酸堿環(huán)境下有不同吸收光譜這一特性進(jìn)行精確定量。溴百里香酚藍(lán)有兩種存在形式：基礎(chǔ)形式在620nm附近有最大吸收峰，中性形式在400-430nm有最大吸收峰。以往的方案中，利用基礎(chǔ)形式的溴百里香酚藍(lán)測定pH的比較常見。然而這種檢測單一最大吸收波峰的方案，非常容易受溶液各種因素的影響，任何微小體積變化，溶液成份變化，都會影響最大吸收波長測定結(jié)果。本次介紹的新方案利用中性形式的溴百里香酚藍(lán)，通過測定其在不同pH溶液中的吸收光譜信息（圖2），快速準(zhǔn)確測定溶液pH值（圖3）。