一、引言
化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）是將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合的分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用于抗原、抗體、小分子及藥物的定量檢測(cè)。根據(jù)是否存在分離清洗步驟，化學(xué)發(fā)光可分為異相法和均相法兩大類。目前臨床檢驗(yàn)主流平臺(tái)多采用異相化學(xué)發(fā)光技術(shù)，但其依賴物理分離和洗滌步驟，存在儀器復(fù)雜、檢測(cè)耗時(shí)、操作繁瑣等局限。均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)無(wú)需分離清洗，在液相中直接完成檢測(cè)，為簡(jiǎn)化操作流程、實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)提供了新途徑。本文系統(tǒng)闡述均相化學(xué)發(fā)光的技術(shù)原理、分類特點(diǎn)及臨床應(yīng)用進(jìn)展。

二、化學(xué)發(fā)光技術(shù)的分類
化學(xué)發(fā)光免疫分析可按照不同標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類。根據(jù)分離清洗步驟，分為異相化學(xué)發(fā)光法和均相化學(xué)發(fā)光法。異相法依賴于抗原抗體復(fù)合物與游離成分的物理分離，通常將反應(yīng)物固定于固相載體，通過(guò)磁分離、過(guò)濾或洗滌去除未結(jié)合成分，因此檢測(cè)步驟多、儀器結(jié)構(gòu)復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)。均相法無(wú)需分離清洗，在液相中直接檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、儀器便攜等優(yōu)勢(shì)。

根據(jù)發(fā)光體系的不同，化學(xué)發(fā)光可分為間接化學(xué)發(fā)光、直接化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光和光激化學(xué)發(fā)光。間接化學(xué)發(fā)光采用酶標(biāo)記抗體，通過(guò)酶催化底物產(chǎn)生發(fā)光；直接化學(xué)發(fā)光采用吖啶酯等標(biāo)記物，在氧化劑作用下直接發(fā)光；電化學(xué)發(fā)光通過(guò)電極反應(yīng)觸發(fā)發(fā)光；光激化學(xué)發(fā)光則需外界光源激發(fā)產(chǎn)生單線態(tài)氧介導(dǎo)的能量傳遞。

三、均相化學(xué)發(fā)光的技術(shù)原理
均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)的核心在于實(shí)現(xiàn)液相中免疫反應(yīng)與信號(hào)產(chǎn)生的耦合，無(wú)需物理分離步驟。其中最具代表性的是基于氧通道的發(fā)光氧通道免疫分析（LOCI）技術(shù)。該技術(shù)采用兩種功能化微球：敏感珠包被有鏈霉親和素并含光敏染料，化學(xué)珠包被檢測(cè)抗體并含發(fā)光染料。檢測(cè)時(shí)，樣本中的待測(cè)抗原與生物素化抗體及化學(xué)珠結(jié)合形成夾心復(fù)合物，隨后加入敏感珠，通過(guò)生物素-鏈霉親和素結(jié)合形成免疫復(fù)合物聚集體。在680nm激發(fā)光照射下，敏感珠內(nèi)的光敏染料產(chǎn)生單線態(tài)氧，單線態(tài)氧擴(kuò)散至化學(xué)珠，觸發(fā)發(fā)光染料產(chǎn)生612nm化學(xué)發(fā)光信號(hào)。發(fā)光強(qiáng)度與抗原濃度呈正比。

該技術(shù)的核心創(chuàng)新在于利用單線態(tài)氧的短壽命擴(kuò)散特性實(shí)現(xiàn)能量傳遞，只有在兩種微球近距離聚集時(shí)才能產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)，從而在液相中實(shí)現(xiàn)了特異性檢測(cè)。這一機(jī)制完全避免了分離洗滌步驟，實(shí)現(xiàn)了真正的均相檢測(cè)。

四、均相化學(xué)發(fā)光的技術(shù)優(yōu)勢(shì)
與異相化學(xué)發(fā)光相比，均相技術(shù)具有顯著優(yōu)勢(shì)。首先，無(wú)需分離洗滌步驟，簡(jiǎn)化了操作流程，縮短了檢測(cè)時(shí)間，單個(gè)樣本檢測(cè)可在15-30分鐘內(nèi)完成。其次，儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)化，無(wú)需復(fù)雜的液路系統(tǒng)和磁分離模塊，降低了設(shè)備成本和故障率，更適用于床旁快速檢測(cè)（POCT）場(chǎng)景。第三，液相反應(yīng)環(huán)境更接近生理狀態(tài)，避免了固相包被可能引入的構(gòu)象改變，有利于保持抗原抗體結(jié)合活性。第四，反應(yīng)體系封閉，減少了操作過(guò)程中的污染風(fēng)險(xiǎn)，提高了檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

五、均相化學(xué)發(fā)光的臨床應(yīng)用
均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。在傳染病篩查方面，可用于乙肝、丙肝、艾滋病等標(biāo)志物的快速檢測(cè)；在腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)中，可用于甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）等的定量分析；在心肌標(biāo)志物檢測(cè)領(lǐng)域，適用于肌鈣蛋白、肌紅蛋白等的床旁快速檢測(cè)；在治療藥物監(jiān)測(cè)（TDM）中，可用于免疫抑制劑、抗生素等血藥濃度監(jiān)測(cè)。

該技術(shù)尤其適用于基層醫(yī)療和急診場(chǎng)景，其操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速的特點(diǎn)可顯著提升服務(wù)效率。隨著技術(shù)進(jìn)步，檢測(cè)靈敏度和線性范圍不斷提升，已能滿足主流臨床項(xiàng)目的檢測(cè)需求。

六、均相化學(xué)發(fā)光的技術(shù)挑戰(zhàn)
盡管均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)優(yōu)勢(shì)明顯，但仍面臨若干挑戰(zhàn)。單線態(tài)氧的產(chǎn)生和傳遞對(duì)環(huán)境因素敏感，樣本中的淬滅劑可能干擾信號(hào)檢測(cè)。兩種微球的穩(wěn)定性及批間一致性對(duì)試劑盒質(zhì)量控制提出更高要求。激發(fā)光源和檢測(cè)光路的設(shè)計(jì)需要精密光學(xué)系統(tǒng)，增加了儀器開(kāi)發(fā)的復(fù)雜性。此外，與傳統(tǒng)異相平臺(tái)相比，均相技術(shù)的項(xiàng)目覆蓋度仍有待擴(kuò)展。

七、展望
隨著體外診斷（IVD）技術(shù)向快速化、便攜化、智能化方向發(fā)展，均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)迎來(lái)了重要發(fā)展機(jī)遇。未來(lái)技術(shù)突破將集中于新型發(fā)光探針的開(kāi)發(fā)、信號(hào)放大策略的優(yōu)化、多聯(lián)檢能力的拓展以及與微流控技術(shù)的融合。國(guó)產(chǎn)均相化學(xué)發(fā)光平臺(tái)的成熟將為基層醫(yī)療和急診救治提供更優(yōu)解決方案，推動(dòng)我國(guó)體外診斷產(chǎn)業(yè)向高質(zhì)量方向發(fā)展。隨著技術(shù)不斷完善和臨床應(yīng)用深入，均相化學(xué)發(fā)光有望在POCT領(lǐng)域發(fā)揮更大作用。

HICA均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)原理與應(yīng)用進(jìn)展-南京優(yōu)愛(ài)(UA BIO), 重組蛋白專家