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Pipetty Pro電動移液器在蛋白質含量測定(雙縮脲法)中的應用

瀏覽次數:620 發(fā)布日期:2025-10-21  來源:廣州程淇生物
方案摘要:在雙縮脲法測定蛋白質含量等需精密量取多梯度體積溶液的實驗中,Pipetty Pro 非等量連續(xù)加樣槍可顯著提升操作效率與精度。其核心優(yōu)勢在于:支持非等量連續(xù)加樣,無需反復更換槍頭或調整參數,可一次性完成對照品 0.2-1.0mL 梯度量取及供試品靈活取樣,減少操作步驟達 60% 以上;精度高,移液誤差小,滿足實驗 “精密量取” 要求;人體工學設計降低操作疲勞。不僅有效縮短實驗時間,還可以降低人為誤差,為標準曲線建立及供試品測定提供穩(wěn)定可靠的移液支持,尤其適合多組平行實驗及梯度濃度配置場景。
 
方案詳情:
一、實驗原理
       
雙縮脲試液與蛋白質中的肽鍵反應,生成紫色絡合物。該絡合物在 540nm 波長下的吸光度,與蛋白質濃度在一定范圍內呈線性關系,可通過對照品的線性回歸方程計算供試品中蛋白質的濃度。
 
二、實驗準備
1、設配和材料
① Pipetty電動移液器MSIC12-01-1000、MSIC90-001-10mL;
② 紫外-可見分光光度計;
③ 玻璃試管;
④ 計時器。
 
2、試劑和材料
① 雙縮脲試液 
② 對照品溶液 
③ 供試品溶液
 
三、實驗步驟
1、對照品組操作
a) 使用Pipetty Pro 非等量電動移液器,在平板上提前設置好分液量,分別是 0.0mL(空白管)、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,吸取試劑,連續(xù)加至試管中。
 
b) 重復上一個移液步驟,向每支試管中加水至總體積 1.0mL,確保各管體積一致。
c) 每管分別加入雙縮脲試液 4.0mL,立即混勻,避免局部反應不均。
d) 室溫放置 30 分鐘,保證反應充分進行。
e) 測定吸光度:按紫外 - 可見分光光度法,在 540nm 波長處測定各管吸光度,以 0 號空白管調零。
2、供試品組操作
a) 根據供試品預期蛋白質濃度,使用Pipetty Pro 精密量取適量供試品溶液精密量取適量供試品溶液,使最終吸光度落在對照品吸光度范圍內,置于具塞試管中。
b) 重復對照品組的 “定容→加試劑→混勻→室溫放置 30 分鐘” 操作。
 
c) 在相同 540nm 波長下,以 0 號空白管調零,測定供試品溶液吸光度。
 
四、結果判定
1、以對照品溶液的濃度為橫坐標(X),對應的吸光度為縱坐標(Y),計算得到線性回歸方程(Y = aX + b)。
2、將供試品的吸光度代入線性回歸方程,反算出供試品溶液中蛋白質的濃度。
3、將供試品溶液濃度乘以供試品的稀釋倍數,得到供試品中蛋白質的實際含量。
發(fā)布者:廣州市程淇生物技術有限公司
聯(lián)系電話:020-87228031 020-87228316
E-mail:info@icfbio.com

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