維持腸道健康對畜禽的整體健康和生產(chǎn)性能至關重要，因其會影響畜禽的營養(yǎng)吸收、免疫功能和抗病能力。氧化應激與炎癥是威脅腸道完整性的關鍵因素。本研究旨在探究一種由 45 種本地草藥制成的發(fā)酵植物浸膏（FPM）的抗氧化、抗炎及腸道屏障強化功能。該浸膏采用特定發(fā)酵工藝制備，借助植物自身的固有微生物群提升生物活性與可持續(xù)性。體內實驗結果顯示，在黑腹果蠅模型中，F(xiàn)PM 可顯著降低活性氧（ROS）水平；在氧化應激條件下的秀麗隱桿線蟲模型中，F(xiàn)PM 能提高線蟲的運動活性并延長半數(shù)致死時間（LT50），但在上述兩種模型中，F(xiàn)PM 均未對腸道屏障完整性產(chǎn)生影響。

方法

1.秀麗隱桿線蟲氧化應激分析：為評估 FPM 在氧化應激條件下的保護作用，研究采用紅外微束系統(tǒng)實時記錄線蟲的運動活性。將經(jīng) FPM 處理 72 小時的 N2 品系成年線蟲，用含 0.5%（質量體積比）聚乙二醇 3350 的 S - 基礎培養(yǎng)基沖洗收集。通過 S - 基礎培養(yǎng)基調整線蟲濃度，使每孔線蟲數(shù)量約為 80 條。隨后，向 96 孔平底培養(yǎng)板的各孔中加入 92.5 μL 線蟲懸液，每組實驗設 8 個復孔。使用 WMicrotracker One 線蟲行為分析儀測定線蟲 60 分鐘的基礎運動活性，作為后續(xù)各孔數(shù)據(jù)歸一化的參考值。之后，向每孔加入 7.5 μL 濃度為 1 mol/L 的百草枯（PQ）水溶液，使孔內bai草枯終濃度達到 75 mmol/L 以誘導氧化應激；對照組則加入等量去離子水替代百草枯。繼續(xù)使用 WMicrotracker One 分析儀連續(xù)記錄 1000 分鐘內線蟲的運動活性。實驗結果以線蟲運動活性相對于基礎活性的歸一化值表示。曲線下面積（AUC）計算時，數(shù)據(jù)以未處理對照組為參照進行歸一化；半數(shù)致死時間（LT50）計算時，數(shù)據(jù)以組內歸一化處理后進行非線性回歸分析。

 
2.藍蟲實驗（Smurf Assay）：采用亮藍 FCF 染料開展藍蟲實驗，以評估秀麗隱桿線蟲的腸道屏障完整性。藍蟲模型常用于模擬腸道滲漏綜合征，當線蟲腸道屏障受損時，不可被腸道吸收的亮藍 FCF 染料會滲入周圍組織，使線蟲全身染為藍色。本研究探究 FPM 對秀麗隱桿線蟲年齡相關性腸道完整性損傷的調控作用。統(tǒng)計各處理組中藍蟲的數(shù)量，并計算其占每組線蟲總數(shù)的比例。

本研究分析了 FPM 對百草枯誘導的氧化應激狀態(tài)下秀麗隱桿線蟲的保護作用，以線蟲的運動活性變化作為核心觀測指標。圖 6a 展示了未處理組、氧化應激組及氧化應激 + FPM 處理組線蟲的運動活性變化曲線。結果顯示，百草枯誘導的氧化應激會顯著抑制線蟲運動活性，而 FPM 處理可逆轉該抑制效應。經(jīng) 0.5%、1% 和 2% 濃度 FPM 預處理的線蟲，耐受百草枯誘導氧化應激的時間顯著長于單純氧化應激對照組。非線性回歸分析結果表明，F(xiàn)PM 處理組線蟲的半數(shù)致死時間（LT50）提升至 251-269 分鐘，而單純氧化應激對照組僅為 148 分鐘，提示 FPM 可延長氧化應激條件下線蟲的存活時間。圖 6b 匯總了各組線蟲運動活性隨時間變化的曲線下面積（AUC），相較于氧化應激對照組，0.5%、1% 和 2% 濃度 FPM 處理組線蟲的運動活性呈劑量依賴性顯著升高，其中 2% 濃度 FPM 處理組線蟲的運動活性提升幅度達 115%（P < 0.0001）。如圖 6c 所示，0.5%、1% 和 2% 濃度 FPM 處理均未顯著提升秀麗隱桿線蟲的腸道屏障完整性。上述結果表明，在本實驗條件下，F(xiàn)PM 可有效緩解百草枯誘導的秀麗隱桿線蟲氧化應激，但對其腸道屏障完整性無顯著影響。

圖 6 發(fā)酵植物浸膏（FPM）可緩解秀麗隱桿線蟲氧化應激，但無法改善其腸道屏障完整性 注：(a) bai草枯誘導氧化應激條件下，F(xiàn)PM 處理組秀麗隱桿線蟲的運動活性檢測，實驗設 3 次獨立重復，每組 8 個復孔（樣本量 n=24）；(b) 以運動活性隨時間變化的曲線下面積（AUC）表征 FPM 的抗氧化能力，實驗設 3 次獨立重復，每組 8 個復孔（樣本量 n=24）；(c) FPM 處理組秀麗隱桿線蟲腸道屏障完整性的藍蟲實驗檢測，實驗設 3 次獨立重復（樣本量 n=3）。

本研究結果表明，發(fā)酵植物浸膏（FPM）有望作為功能性飼料添加劑，通過減輕氧化應激和炎癥反應，改善畜禽腸道健康。
 

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