缺氧調(diào)控非酒精性脂肪肝脂質(zhì)滴自噬與線粒體功能的機(jī)制研究
非酒精性脂肪肝（NAFLD）影響著全球四分之一的普通人群，在重度肥胖患者中尤為高發(fā)。該病以肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積為主要特征，是一個(gè)動(dòng)態(tài)進(jìn)展的過(guò)程。隨著脂質(zhì)沉積的增多，會(huì)加重肝細(xì)胞的血液學(xué)損傷，引發(fā)氧化應(yīng)激、線粒體損傷，并促使炎癥因子釋放。
很多研究強(qiáng)調(diào)了非酒精性脂肪肝（NAFLD）與肝脂質(zhì)滴自噬失調(diào)及線粒體功能異常之間的密切關(guān)聯(lián)。然而，缺氧條件下脂質(zhì)滴自噬與線粒體功能之間復(fù)雜的相互作用在很大程度上仍是未知領(lǐng)域。
2026年9月，青海大學(xué)附屬醫(yī)院馬艷艷教授團(tuán)隊(duì)在Plos One發(fā)表題為A new investigation of nonalcoholic fatty liver disease: Effects of hypoxia on mitochondrial function and lipid droplet autophagy的文章。該研究表明，缺氧條件可增強(qiáng)NAFLD小鼠的脂質(zhì)滴自噬，減少糖脂積累，并減輕線粒體損傷。
本研究在2200米和4500米海拔處構(gòu)建了NAFLD小鼠模型，同時(shí)在21%和1%的氧濃度下培養(yǎng)肝細(xì)胞，并添加油酸誘導(dǎo)脂質(zhì)積累。通過(guò)核磁共振（NMR）、過(guò)碘酸-希夫（PAS）染色、油紅O染色、免疫熒光、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）、流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、電子顯微鏡及細(xì)胞能量代謝實(shí)驗(yàn)等多種方法，對(duì)不同海拔的NAFLD小鼠進(jìn)行了綜合評(píng)估。與中海拔（2200米）高脂飲食組相比，高海拔（4500米）高脂飲食組小鼠的脂質(zhì)沉積和糖原含量減少，脂質(zhì)滴自噬增強(qiáng)，線粒體損傷和炎癥損傷減輕。與21%氧濃度+油酸組相比，1%氧濃度+油酸組的脂質(zhì)滴自噬增強(qiáng)，細(xì)胞適應(yīng)性提高。
實(shí)驗(yàn)部分：
Tissue Cytometry技術(shù)主要用于肝臟組織樣本的成像獲取與定量分析，為驗(yàn)證缺氧對(duì)非酒精性脂肪肝（NAFLD）小鼠的影響提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支撐，具體作用體現(xiàn)在以下兩方面：
1. 成像獲取：利用TissueFAXS系統(tǒng)獲取NAFLD小鼠肝臟組織的PAS染色、Oil Red O染色以及免疫熒光染色圖像，清晰呈現(xiàn)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)、糖原分布、脂質(zhì)沉積及脂噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
2. 定量分析：借助StrataQuest軟件，對(duì)染色圖像進(jìn)行精準(zhǔn)定量，包括計(jì)算肝組織中脂質(zhì)滴百分比、糖原百分比，以及單位面積內(nèi)脂噬相關(guān)蛋白陽(yáng)性細(xì)胞比例、細(xì)胞核間平均距離等指標(biāo)，為對(duì)比不同海拔（缺氧程度）下NAFLD小鼠的病理變化提供客觀數(shù)據(jù)依據(jù)。
Figure 4 缺氧條件下非酒精性脂肪肝（NAFLD）小鼠及脂質(zhì)蓄積肝細(xì)胞中脂質(zhì)滴自噬增強(qiáng)。
很多研究強(qiáng)調(diào)了非酒精性脂肪肝（NAFLD）與肝脂質(zhì)滴自噬失調(diào)及線粒體功能異常之間的密切關(guān)聯(lián)。然而，缺氧條件下脂質(zhì)滴自噬與線粒體功能之間復(fù)雜的相互作用在很大程度上仍是未知領(lǐng)域。
本研究在2200米和4500米海拔處構(gòu)建了NAFLD小鼠模型，同時(shí)在21%和1%的氧濃度下培養(yǎng)肝細(xì)胞，并添加油酸誘導(dǎo)脂質(zhì)積累。通過(guò)核磁共振（NMR）、過(guò)碘酸-希夫（PAS）染色、油紅O染色、免疫熒光、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）、流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、電子顯微鏡及細(xì)胞能量代謝實(shí)驗(yàn)等多種方法，對(duì)不同海拔的NAFLD小鼠進(jìn)行了綜合評(píng)估。與中海拔（2200米）高脂飲食組相比，高海拔（4500米）高脂飲食組小鼠的脂質(zhì)沉積和糖原含量減少，脂質(zhì)滴自噬增強(qiáng)，線粒體損傷和炎癥損傷減輕。與21%氧濃度+油酸組相比，1%氧濃度+油酸組的脂質(zhì)滴自噬增強(qiáng)，細(xì)胞適應(yīng)性提高。
實(shí)驗(yàn)部分：
Tissue Cytometry技術(shù)主要用于肝臟組織樣本的成像獲取與定量分析，為驗(yàn)證缺氧對(duì)非酒精性脂肪肝（NAFLD）小鼠的影響提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支撐，具體作用體現(xiàn)在以下兩方面：
1. 成像獲取：利用TissueFAXS系統(tǒng)獲取NAFLD小鼠肝臟組織的PAS染色、Oil Red O染色以及免疫熒光染色圖像，清晰呈現(xiàn)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)、糖原分布、脂質(zhì)沉積及脂噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
2. 定量分析：借助StrataQuest軟件，對(duì)染色圖像進(jìn)行精準(zhǔn)定量，包括計(jì)算肝組織中脂質(zhì)滴百分比、糖原百分比，以及單位面積內(nèi)脂噬相關(guān)蛋白陽(yáng)性細(xì)胞比例、細(xì)胞核間平均距離等指標(biāo)，為對(duì)比不同海拔（缺氧程度）下NAFLD小鼠的病理變化提供客觀數(shù)據(jù)依據(jù)。
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