一、CD40/CD40L信號通路的分子基礎(chǔ)
CD40是腫瘤壞死因子受體超家族的成員，為48 kDa的I型跨膜蛋白，廣泛表達于免疫細胞，特別是B細胞、樹突狀細胞和單核細胞，在連接先天免疫和適應(yīng)性免疫方面發(fā)揮重要作用。CD40L是CD40的同源配體，為39 kDa的II型跨膜蛋白，表達主要限于造血系統(tǒng)的細胞，如血小板、粒細胞、活化的T細胞、活化的B細胞和活化的自然殺傷細胞。CD40/CD40L相互作用需要適當?shù)氖荏w聚類和三聚化，TNF-SF配體天然作為三價功能單元存在，受體組裝成功能性三聚體信號復(fù)合物通過天然配體單元的結(jié)合發(fā)生。TR-FRET CD40/CD40L試劑盒可用于定量檢測CD40與CD40L的結(jié)合活性，為研究該信號通路的分子機制提供技術(shù)工具。

二、CD40/CD40L的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制
同源配體與受體的連接誘導(dǎo)形成空間明確的三聚體信號復(fù)合物，促進TNF受體相關(guān)因子和NFκB激活劑-1的募集。信號復(fù)合體的特定組成主要取決于細胞類型，觸發(fā)各種途徑。與TRAF6結(jié)合主要激活JAK/STAT3通路，TRAF1/2誘導(dǎo)MKK/p38/ERK1/2信號，Act1在激活NFκB通路、JNK和PI3K信號中具有多種功能，并與TRAF3結(jié)合放大MKK/p38/ERK1/2信號。根據(jù)具體情況，CD40連接可以激活經(jīng)典和非經(jīng)典NFκB途徑。CD40信號傳導(dǎo)是單核細胞成熟過程的重要觸發(fā)因素，主要驅(qū)動分化為M1型巨噬細胞和樹突狀細胞。TR-FRET技術(shù)可應(yīng)用于研究CD40與CD40L結(jié)合后的構(gòu)象變化，評估不同條件下受體配體相互作用的動態(tài)變化。

三、CD40在免疫系統(tǒng)中的功能
樹突狀細胞表面的CD40參與促進細胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，誘導(dǎo)共刺激分子的表達，并促進抗原的交叉呈遞。CD40通過上調(diào)CD54和CD86等表面蛋白增加樹突狀細胞與T細胞的相互作用，從而激活T細胞。CD40L的主要功能是通過激活樹突狀細胞增強T細胞的抗原呈遞。CD40激活后，樹突狀細胞可促進抗腫瘤T細胞激活，并重新教育巨噬細胞以破壞腫瘤基質(zhì)。CD40激活是將冷腫瘤轉(zhuǎn)化為熱腫瘤的關(guān)鍵，使它們對檢查點抑制敏感。在樹突狀細胞上，CD40激活導(dǎo)致MHC分子的上調(diào)、共刺激分子如CD86的表達增加，以及其他腫瘤壞死因子超家族配體的上調(diào)。TR-FRET CD40/CD40L試劑盒可用于篩選能夠阻斷或增強CD40與CD40L結(jié)合的分子，評估其免疫調(diào)節(jié)活性。

四、基于抗體的CD40靶向策略
誘導(dǎo)CD40信號傳導(dǎo)的研究策略可以大致分為基于抗體或基于CD40L的方法。CD40抗體在癌癥治療中主要有三種應(yīng)用。直接的抗腫瘤作用方面，CD40已成為B細胞淋巴瘤的治療靶標，CD40單抗對晚期霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤具有一定的抑制作用，在B細胞淋巴瘤中對惡性細胞顯示出有效的抗增殖和促凋亡活性。誘導(dǎo)T細胞免疫方面，使用化學療法增強CD40激動劑的T細胞刺激能力，化療誘導(dǎo)腫瘤細胞死亡釋放抗原，被抗原呈遞細胞吞噬，CD40激動劑激活抗原呈遞細胞以呈遞腫瘤抗原并刺激腫瘤特異性T細胞。激活先天免疫監(jiān)視方面，CD40激動劑刺激腫瘤浸潤性骨髓細胞以誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)纖維化程度降低，使腫瘤對化學療法更敏感。

五、CD40/CD40L在CAR-T細胞治療中的應(yīng)用
在CAR-T細胞治療中，CD40L可展示在CAR-T細胞表面。通過P2A連接CD40L，使得CAR-T細胞上表達CD40L。CD40與CD4陽性T輔助細胞上表達的CD40L相互作用的重要功能是激活和許可樹突狀細胞以啟動CD8陽性效應(yīng)T細胞。這是通過細胞表面共刺激分子和MHC分子的上調(diào)以及樹突狀細胞產(chǎn)生細胞因子導(dǎo)致有效T細胞激活來實現(xiàn)的。在沒有CD40信號傳導(dǎo)的情況下，未經(jīng)許可的樹突狀細胞激活細胞毒性T淋巴細胞會導(dǎo)致T細胞無反應(yīng)或缺失以及調(diào)節(jié)性T細胞的產(chǎn)生。另一種策略是使CAR-T細胞自分泌抗CD40抗體，以提高CAR-T的抗腫瘤活性。CD40L-CAR-T細胞與腫瘤細胞共培養(yǎng)后，可上調(diào)腫瘤細胞表面共刺激分子、粘附分子、HLA分子和死亡受體的表達，增強自體白血病細胞的免疫原性。TR-FRET技術(shù)可應(yīng)用于評估CAR-T細胞表面CD40L的表達水平和功能活性。

六、研究展望
CD40/CD40L通路在連接先天免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮核心作用，是腫瘤免疫治療的重要靶點。基于TR-FRET技術(shù)的CD40/CD40L試劑盒為研究該信號通路提供了靈敏、高效的檢測工具，可應(yīng)用于分子機制研究和藥物篩選。未來研究將進一步開發(fā)具有更高選擇性和更好藥代動力學性質(zhì)的CD40激動劑抗體，優(yōu)化CD40L在CAR-T細胞中的表達策略，探索CD40靶向治療與免疫檢查點抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用，為腫瘤患者提供更多治療選擇。

基于TR-FRET技術(shù)的CD40/CD40L信號通路在免疫治療中的作用研究-南京優(yōu)愛(UA BIO), 重組蛋白專家