一、PCSK9的發(fā)現(xiàn)與作用機(jī)制
PCSK9是一種由肝臟合成并負(fù)責(zé)調(diào)控蛋白質(zhì)活性的絲氨酸蛋白酶，于2003年被首次報道。2004年研究發(fā)現(xiàn)鼠科動物試驗中PCSK9過表達(dá)引起LDL-R減少，同時LDL-C升高。2005年有研究報道人群中PCSK9功能缺失突變可降低LDL-C水平。2011年臨床前研究發(fā)現(xiàn)PCSK9功能缺失的患者LDL-C降低28%，冠心病風(fēng)險降低88%。肝細(xì)胞表面的LDL-R可與LDL結(jié)合，由網(wǎng)格蛋白包被囊泡胞吞內(nèi)化，將LDL-C整合入細(xì)胞內(nèi)，隨后LDL-R回到細(xì)胞表面循環(huán)利用。PCSK9可與肝細(xì)胞表面的LDL-R結(jié)合，PCSK9/LDL-R復(fù)合物內(nèi)吞進(jìn)入肝細(xì)胞并在溶酶體中降解，導(dǎo)致肝細(xì)胞表面的LDL-R減少，血液中LDL-C水平升高。TR-FRET PCSK9(D347Y)/LDLR檢測試劑盒可用于定量檢測PCSK9與LDLR的結(jié)合活性，為研究該蛋白的生物學(xué)功能提供技術(shù)工具。

二、他汀類藥物的臨床應(yīng)用與局限性
他汀類藥物通過競爭性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶HMG-CoA還原酶來降低細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平，使血清LDL-C降低。該類藥物的原研藥專利均已過期，進(jìn)入多種仿制藥競爭的市場環(huán)境。他汀類藥物在臨床應(yīng)用中存在一定的局限性，部分患者會出現(xiàn)"他汀不耐受"，臨床常見癥狀有肌炎、肌痛、橫紋肌溶解和肝損傷等。有些患者即使使用最大劑量也不能達(dá)到滿意的調(diào)脂效果。這些局限性促使研究者開發(fā)新型降脂藥物，PCSK9抑制劑成為重要的研發(fā)方向。

三、PCSK9抑制劑的研發(fā)思路
根據(jù)PCSK9的作用機(jī)制，抑制其活性或降低其水平可提高肝細(xì)胞表面LDL-R數(shù)量，增加血液中LDL-C的轉(zhuǎn)化。靶向PCSK9的血脂調(diào)節(jié)藥主要有兩種研發(fā)思路：一是阻止PCSK9與LDL-R的結(jié)合，如單克隆抗體、模擬肽和類抗體蛋白藥；二是抑制PCSK9分子的表達(dá)或干擾其分泌，如小干擾RNA、反義寡核苷酸和小分子抑制劑。2012年，新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志報道了PCSK9單抗的臨床I期試驗，證實(shí)其可顯著降低健康志愿者和家族性高膽固醇血癥受試者的LDL-C。TR-FRET技術(shù)可應(yīng)用于篩選能夠阻斷PCSK9與LDLR結(jié)合的分子，評估其阻斷效率。

四、PCSK9單克隆抗體的臨床研究
PCSK9單克隆抗體通過靶向血漿PCSK9發(fā)揮作用，目前臨床應(yīng)用較廣泛的包括依洛尤單抗和阿利西尤單抗。FOURIER研究在27564例ASCVD患者中評估了依洛尤單抗的療效，結(jié)果顯示治療48周可顯著降低MACE事件風(fēng)險達(dá)15%，并降低缺血性卒中風(fēng)險達(dá)20%。ODYSSEY OUTCOMES研究在18924例ACS患者中評估了阿利西尤單抗的療效，亞組分析表明對于既往缺血性卒中患者，治療78周可顯著降低缺血性卒中風(fēng)險。GLAGOV研究表明，他汀聯(lián)合PCSK9抑制劑治療76周后，64%的患者實(shí)現(xiàn)了動脈粥樣硬化斑塊逆轉(zhuǎn)。這些臨床研究證實(shí)了PCSK9單克隆抗體的有效性和安全性。

五、小干擾RNA藥物的研發(fā)進(jìn)展
小干擾RNA藥物inclisiran通過誘導(dǎo)PCSK9 mRNA降解，阻止其翻譯成蛋白質(zhì)，實(shí)現(xiàn)長效治療。Ⅰ期臨床試驗中，單劑量和多劑量方案均使LDL-C和PCSK9水平顯著降低，作用可持續(xù)達(dá)6個月。Ⅲ期ORION-10和ORION-11試驗結(jié)果顯示，治療510天時LDL-C水平分別降低了52.3%和49.9%，不良事件均為輕度或中度。該藥物每年2次皮下注射的給藥方式，為患者提供了更便捷的治療選擇。TR-FRET PCSK9(D347Y)/LDLR檢測試劑盒可用于評估該類藥物對PCSK9與LDLR結(jié)合的間接影響，驗證其作用機(jī)制。

六、PCSK9抑制劑的臨床價值評估
PCSK9抑制劑作為新型降脂藥物，與他汀類藥物相比具有不同的作用機(jī)制和臨床定位。對于他汀不耐受或他汀治療后血脂仍不達(dá)標(biāo)的患者，PCSK9抑制劑提供了重要的治療選擇。臨床研究證實(shí)PCSK9抑制劑可顯著降低LDL-C水平，并降低心血管事件風(fēng)險。然而，皮下注射的給藥方式和高昂的治療成本限制了其廣泛應(yīng)用。隨著小干擾RNA藥物等新型制劑的開發(fā)，給藥頻率降低，患者的依從性有望提高。TR-FRET PCSK9(D347Y)/LDLR檢測試劑盒在該類藥物研發(fā)和質(zhì)量控制中具有重要應(yīng)用價值，可提供高通量、高靈敏度的結(jié)合活性檢測。

基于TR-FRET技術(shù)的PCSK9靶向血脂調(diào)節(jié)藥物研究進(jìn)展-南京優(yōu)愛(UA BIO), 重組蛋白專家