銳賽小課堂1217-156

FCM數(shù)據(jù)的存貯的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排隊(List Mode)方式。易于加工處理分析，但缺乏直觀性，數(shù)據(jù)的顯示通常有一維直方圖、二維點圖、等高線圖、密度圖等幾種；由數(shù)據(jù)還可以做出標準曲線進行定量分析。
 

Q1：坐標軸的意義？

1、  單參數(shù)直方圖

每一個細胞單參數(shù)的測量數(shù)據(jù)可以整理成統(tǒng)計分布，以直方圖的方式來顯示。在圖中，橫坐標表示熒光信號或散射光信號相對強度的值，其單位是道數(shù)（channel），可以是線形（line）或者對數(shù)（log）。縱坐標一般是相對細胞/粒子數(shù)（count）！
 

2、二維圖

在二維圖的中，橫坐標/縱坐標都表示熒光信號或散射光信號相對強度的值，可以是線形（line）或者對數(shù)（log）。雙參數(shù)圖可以將樣品細胞群分開，從而方便對感興趣的細胞進行分析。

Q2：“Gate”和 “Regin”？

設門是流式細胞分析中一種重要的技術，只有通過最佳的設門方式，才能準確地獲取和分析數(shù)據(jù)，從而得到臨床診斷和科研中有價值的信息。

On-line gating(threshold gating)監(jiān)測/獲取數(shù)據(jù)
Off-line gating： 分析實驗數(shù)據(jù)          散射光設門/熒光設門          散射光/熒光聯(lián)合設門         

多重邏輯門(組合門)多重邏輯門 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)

其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色?
 

流式圖中的顏色為區(qū)分不同細胞群而人為指定, 與熒光顏色無關!!

Q4：流式圖中的陰/陽（N/P）如何劃分?

如何做M1陰性界限？實際上，這個M1的劃分完全是根據(jù)陰性(同型)對照來的！如下圖：左圖為同型對照，即：您所檢測的物質在陰性組中的基礎表達量，可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎水平、未受刺激時等。右圖即陽性組，也就是接受刺激后，功能狀態(tài)下、藥物作用后等。

Q5:  這么巧，陰性正好在101劃分？？

其實, 我們可以人為地將電壓，放大倍數(shù)調到相應的大小，使陰性的右邊界在某一個值上，（通常劃在101附近）這樣后期做sample時好看！當然也可以調到102，103次方。

Q6：為什么要進行熒光補償？

流式細胞分析中經常要用到2種以上的熒光標記抗體進行染色，而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊。

“熒光補償”這個術語是指修正熒光滲漏的過程，如從探測器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號。

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