眾所周知,胎牛血清是細胞培養(yǎng)界的“香餑餑”,備受胞胞們的“寵愛”,其實還有一個“香煎餅”,大家可知道?對一些“挑食”的細胞,馬血清可謂是散發(fā)著一股“煎餅的清香”。
馬血清的第一大功能是“滋養(yǎng)”一些特別的細胞,如免疫細胞類,成纖維細胞類,上皮細胞類,神經(jīng)細胞類等。需要添加馬血清的常見細胞類型如下:
1.NK(人外周血自然殺傷細胞)和NK-92 (人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞)
營養(yǎng)體系:74%α-MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+100-200U/mL recombinant IL-2+12.5%馬血清優(yōu)級+12.5%胎牛血清優(yōu)級+ 1%雙抗
2.EL-4 (小鼠胸腺淋巴瘤細胞)
營養(yǎng)體系:89%DMEM高糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%馬血清優(yōu)級+ 1%雙抗
3.L929 (小鼠成纖維細胞)和CRFK (貓腎細胞)
營養(yǎng)體系:89%MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%馬血清優(yōu)級+ 1%雙抗
4.MCF 10A (人正常乳腺上皮細胞)
營養(yǎng)體系:94% DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%馬血清+ 1%雙抗+ 20ng/ml EGF+0.5ug/ml氫化可的松Hydrocortisone+ 100ng/ml霍亂霉素choleratoxin+10ug/ml胰島素insulin
5.PC-12(Undifferentiated) (大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化))
營養(yǎng)體系:79%RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基+15%馬血清+ 5%胎牛血清優(yōu)級+ 1%雙抗
馬血清第二大功能是誘導(dǎo)分化作用,有文獻報道【1】馬血清在 5-氮雜胞苷誘導(dǎo)脂肪干細胞成肌細胞實驗中發(fā)揮重要作用。
該研究如下:將第1代長滿100 mm培養(yǎng)皿的脂肪干細胞傳代至3個6孔板,實驗組培養(yǎng)基中加入體積分?jǐn)?shù)為5%馬血清+10 μmol/L 5-氮雜胞苷;對照組培養(yǎng)基中單純添加 10 μmol/L 的 5-氮雜胞苷;空白組為單純低糖 DMEM 培養(yǎng)基,其余培養(yǎng)、傳代及鑒定所需的條件相同。每日光鏡觀察記錄形態(tài),在培養(yǎng)的第 7,14,28,35 天行免疫熒光和流式細胞儀檢測肌蛋白表達差異。
該文獻的結(jié)果與結(jié)論是免疫熒光檢測成肌特異性胞質(zhì)蛋白表達以及流式細胞檢測相應(yīng)蛋白表達率提示,加入馬血清后的實驗組脂肪干細胞的成肌速度和誘導(dǎo)成肌所需時間明顯比單純加入 5-氮雜胞苷的對照組更有優(yōu)勢。實驗初步表明馬血清在促進脂肪干細胞誘導(dǎo)成肌方面起著縮短誘導(dǎo)成肌所需時間的作用。
同時,馬血清在誘導(dǎo)C2C12 (小鼠成肌細胞)分化為多核肌管方面也發(fā)揮重大作用。C2C12細胞是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌細胞株的亞克;該細胞分化很快,形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。將狀態(tài)良好的骨骼肌細胞以0.9×105接種在96孔板上(每孔100ul),置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后,待細胞融合到70-80%后,更換成的含有2%馬血清的完全培養(yǎng)基中,進行誘導(dǎo)分化。(如圖2所示)

圖2 C2C12 (小鼠成肌細胞)向多核肌管方向分化
另外,也有文獻報道【2】傳代培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞(P3)在20%馬血清的L-DMEM培養(yǎng)液中可分化為脂肪細胞。
此外, 10%馬血清可代替FBS用于支持綿羊紅細胞的體外抗體應(yīng)答; 血清 IgG 制備,白蛋白的提取及生物活性研究;免疫組化(IHC)、酶聯(lián)免疫(ELISA )等免疫實驗的封閉劑。
【1】劉杰,傅強.馬血清在脂肪干細胞成肌誘導(dǎo)中的作用[J].中國組織工程研究, 15(14)
【2】趙文靜,陳亞潔,劉薇.人骨髓間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志.2006.16(18):2744-2747
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