圖1. FDA接收間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞3P協(xié)議，出具主文件確認(rèn)函

3P檢測(cè)法核心內(nèi)容
MSCs主要通過(guò)旁分泌信號(hào)發(fā)揮作用而非細(xì)胞分化，同時(shí)與國(guó)際細(xì)胞與基因治療學(xué)會(huì)（ISCT）指南保持一致。通過(guò)評(píng)估MSCs的三大核心屬性實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確質(zhì)控：

1. Property（細(xì)胞屬性），確保細(xì)胞類型準(zhǔn)確無(wú)誤；
2. Purity（純度），保證細(xì)胞無(wú)污染物、無(wú)異質(zhì)細(xì)胞群；
3. Potency（功能特性），驗(yàn)證細(xì)胞具備有效的生物學(xué)功能。

重要意義與影響

1. 行業(yè)標(biāo)桿確立：作為FDA認(rèn)可的全球早期的MSCs質(zhì)控協(xié)議，3P檢測(cè)法標(biāo)志著MSCs表征正向標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)變，為行業(yè)建立了新的質(zhì)量基準(zhǔn)。
2. 風(fēng)險(xiǎn)有效降低：能夠提前規(guī)避腫瘤形成、治療效果不穩(wěn)定等潛在風(fēng)險(xiǎn)，讓臨床醫(yī)生和患者可在治療前驗(yàn)證細(xì)胞質(zhì)量。
3. 推動(dòng)全球行業(yè)發(fā)展：有助于簡(jiǎn)化新藥臨床試驗(yàn)申請(qǐng)流程、提升臨床試驗(yàn)可靠性，還能促進(jìn)全球范圍內(nèi)MSC產(chǎn)品評(píng)估的統(tǒng)一化，加速再生醫(yī)學(xué)從“干細(xì)胞中心模式”向“基質(zhì)細(xì)胞中心模式”的轉(zhuǎn)型。

企業(yè)亟待推進(jìn)的核心變革
1.研發(fā)策略重構(gòu)：從“干細(xì)胞導(dǎo)向”轉(zhuǎn)向“基質(zhì)細(xì)胞功能導(dǎo)向”

• 核心指標(biāo)調(diào)整：摒棄傳統(tǒng)的“三向分化能力”評(píng)估，轉(zhuǎn)而按照3P檢測(cè)法與ISCT標(biāo)準(zhǔn)，聚焦細(xì)胞身份鑒定（CD73/CD90/CD105陽(yáng)性、CD45陰性）、純度控制（無(wú)異質(zhì)細(xì)胞群、污染物殘留低于閾值）、功能活性驗(yàn)證（旁分泌細(xì)胞因子能力、免疫調(diào)節(jié)活性）。
• 早期研發(fā)整合質(zhì)控：將3P檢測(cè)嵌入細(xì)胞株篩選、工藝開發(fā)階段，而非臨床試驗(yàn)后期補(bǔ)充，降低研發(fā)失敗風(fēng)險(xiǎn)；針對(duì)誘導(dǎo)性MSC（iMSC）等新型產(chǎn)品，需額外開展重編程因子殘留、全基因組測(cè)序等專項(xiàng)檢測(cè)。

2.質(zhì)量體系升級(jí)：建立符合cGMP的全流程質(zhì)控體系

• 生產(chǎn)工藝優(yōu)化：淘汰二維培養(yǎng)，轉(zhuǎn)向三維培養(yǎng)或灌流培養(yǎng)技術(shù)，提升細(xì)胞均一性；嚴(yán)格執(zhí)行“主細(xì)胞庫(kù)（MCB）+工作細(xì)胞庫(kù)（WCB）”二級(jí)體系，限制MCB傳代不超過(guò)3-5代，確保細(xì)胞功能穩(wěn)定性。
• 原材料質(zhì)控強(qiáng)化：完善供體篩查流程（覆蓋HIV/HBV/HCV/梅毒等病原體），優(yōu)先選擇無(wú)血清、無(wú)異源成分的培養(yǎng)基，降低免疫原性風(fēng)險(xiǎn)。
• 數(shù)據(jù)溯源能力建設(shè)：按照FDA與ISCT要求，建立從供體招募到臨床給藥的全鏈條數(shù)據(jù)記錄系統(tǒng)，確保質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)可追溯、可復(fù)現(xiàn)。

探索與思考
在FDA認(rèn)可MSCs 3P質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)內(nèi)監(jiān)管同步接軌的背景下，企業(yè)對(duì)MSC研發(fā)生產(chǎn)所需膠原酶（核心起始材料）、培養(yǎng)基（核心輔助材料）等起始/輔助材料的思考，核心圍繞材料端適配3P質(zhì)控要求、匹配中美雙報(bào)合規(guī)性、從源頭保障MSC細(xì)胞身份/純度/活性三大核心指標(biāo)展開，同時(shí)結(jié)合企業(yè)工藝升級(jí)（3D/灌流培養(yǎng)）、規(guī)�；�生產(chǎn)需求，形成從“資質(zhì)篩選”到“供應(yīng)鏈管理”的全維度考量。

一、對(duì)膠原酶（MSC分離的核心起始材料）的核心思考
膠原酶是從組織中分離原代MSC的關(guān)鍵試劑，直接決定初始MSC的分離效率、細(xì)胞群純度和初始活性，其質(zhì)量偏差會(huì)傳導(dǎo)至后續(xù)擴(kuò)增環(huán)節(jié)，繼而影響3P檢測(cè)結(jié)果，物料篩選應(yīng)聚焦合規(guī)性、特異性、安全性、可管控性四大維度：

• 合規(guī)資質(zhì)需匹配中美雙報(bào)要求：優(yōu)先選擇擁有FDA-DMF備案、NMPA原輔包備案，且符合《美國(guó)藥典（USP）》《歐洲藥典（EP）》《中國(guó)藥典（ChP）》cGMP生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)的膠原酶產(chǎn)品，確保材料合規(guī)性，避免因材料缺少國(guó)際合規(guī)資質(zhì)，導(dǎo)致MSC產(chǎn)品出海時(shí)FDA核查受阻。
• 酶的特異性與批次一致性需嚴(yán)控：關(guān)注膠原酶的底物特異性，避免非特異性酶解導(dǎo)致MSC表面標(biāo)志物（CD73/CD90/CD105）表達(dá)異常；同時(shí)要求供應(yīng)商提供多批次酶的活性、純度檢測(cè)數(shù)據(jù)，確保批次間性能波動(dòng)很小，避免因酶的差異導(dǎo)致MSC分離后細(xì)胞群異質(zhì)化，影響3P純度檢測(cè)的一致性。
• 酶殘留的檢測(cè)可行性：關(guān)注膠原酶的易去除性，要求供應(yīng)商提供酶殘留的檢測(cè)方法和去除方案，確保MSC分離后經(jīng)洗滌、離心等步驟，避免殘留酶影響MSC的功能活性（如旁分泌、免疫調(diào)節(jié)）。

二、對(duì)培養(yǎng)基（MSC擴(kuò)增的核心輔助材料）的核心思考
培養(yǎng)基是MSC體外擴(kuò)增的核心材料，直接決定擴(kuò)增后MSC的功能活性、批次一致性，是MSC功能活性（Potency）的關(guān)鍵影響因素，其配方體系、功能性、合規(guī)性、工藝適配性等特性應(yīng)能滿足MSC旁分泌功能、免疫調(diào)節(jié)活性的核心要求：

1. 配方體系優(yōu)先選擇無(wú)血清/無(wú)動(dòng)物源/化學(xué)成分限定：摒棄添加胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)體系，因?yàn)檠�清的批次間差異大，會(huì)導(dǎo)致MSC擴(kuò)增后活性波動(dòng)、表面標(biāo)志物表達(dá)不穩(wěn)定，同時(shí)引入動(dòng)物源污染物；優(yōu)先選擇無(wú)血清（serum-free）、無(wú)動(dòng)物源（xeno-free）、化學(xué)成分限定（CDM）培養(yǎng)基，從源頭保障MSC的純度，同時(shí)確保擴(kuò)增后細(xì)胞群的均一性，讓MSCs活性數(shù)據(jù)可復(fù)現(xiàn)。
2. 配方功能性需適配MSC功能活性核心要求：MSC的核心治療價(jià)值在于旁分泌功能和免疫調(diào)節(jié)活性（3P檢測(cè)中Potency的核心評(píng)估指標(biāo)），因此需重點(diǎn)關(guān)注培養(yǎng)基是否能維持/增強(qiáng)MSC的旁分泌能力（如分泌IL-6、TGF-β等細(xì)胞因子）、是否能保留MSC的免疫調(diào)節(jié)活性，避免因培養(yǎng)基配方不當(dāng)，導(dǎo)致MSC擴(kuò)增后“表型正常但功能失活”，繼而使功能活性檢測(cè)不通過(guò)。
3. 合規(guī)資質(zhì)與批次一致性需匹配中美雙報(bào)和規(guī)模化生產(chǎn)：選擇具備DMF備案、NMPA原輔包備案，且采用cGMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)的培養(yǎng)基供應(yīng)商，要求供應(yīng)商提供批次間的理化性能（pH、滲透壓）、生物性能（細(xì)胞增殖速率、活性）對(duì)比數(shù)據(jù)，確保批次間波動(dòng)在很小范圍；同時(shí)要求培養(yǎng)基的COA檢測(cè)項(xiàng)目覆蓋內(nèi)毒素、支原體、真菌、細(xì)菌等污染物，且污染物含量低于USP/ChP的嚴(yán)格閾值。
4. 工藝適配性需匹配企業(yè)的生產(chǎn)工藝升級(jí)：隨著3P質(zhì)控倒逼企業(yè)從二維培養(yǎng)轉(zhuǎn)向三維培養(yǎng)、灌流培養(yǎng)等規(guī)�；�工藝，企業(yè)會(huì)關(guān)注培養(yǎng)基是否適配懸浮培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)體系，是否能在高細(xì)胞密度下仍維持MSC的功能活性，同時(shí)兼顧培養(yǎng)基的溶解性、消泡性等工藝特性，避免因培養(yǎng)基不適配規(guī)模化工藝，導(dǎo)致MSC擴(kuò)增效率低、活性下降。
5. 溯源性與供應(yīng)鏈穩(wěn)定性需保障生產(chǎn)連續(xù)性：要求培養(yǎng)基供應(yīng)商提供完整的原料溯源記錄（如氨基酸、生長(zhǎng)因子的來(lái)源）、生產(chǎn)過(guò)程數(shù)據(jù)，且能按需提供定制化的COA報(bào)告，匹配企業(yè)3P前置質(zhì)控的檢測(cè)需求；同時(shí)評(píng)估供應(yīng)商的供應(yīng)鏈能力，優(yōu)先選擇有全球化生產(chǎn)基地、庫(kù)存充足的供應(yīng)商，布局備用供應(yīng)商，避免因培養(yǎng)基斷供影響MSC的規(guī)�；�生產(chǎn)，同時(shí)保障批次間的質(zhì)控一致性。

圖2. Nordmark GMP膠原酶

自2002年以來(lái)，Nordmark生產(chǎn)膠原酶NB產(chǎn)品（點(diǎn)擊獲取產(chǎn)品詳情），并具有不同的純化水平，可用于在體外分離多種組織為單細(xì)胞。Nordmark膠原酶NB產(chǎn)品的范圍從標(biāo)準(zhǔn)膠原酶到高純度膠原酶，分別為研究級(jí)或GMP級(jí)，適合各種細(xì)胞分離應(yīng)用。

GMP膠原酶產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

1. 生產(chǎn)與質(zhì)控嚴(yán)格Nordmark：遵循歐盟GMP指南，在受控潔凈室生產(chǎn)，全程有過(guò)程控制，對(duì)每批次進(jìn)行毒性、單位酶活等準(zhǔn)確檢測(cè)，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
2. 法規(guī)適配性強(qiáng)：相關(guān)GMP產(chǎn)品在FDA備案DMF，TSE安全認(rèn)證完備，助力臨床轉(zhuǎn)化項(xiàng)目推進(jìn)。
3. 批間一致性高：嚴(yán)格的生產(chǎn)與質(zhì)控體系保障各批次產(chǎn)品性能穩(wěn)定，減少實(shí)驗(yàn)與生產(chǎn)中的變量，提升結(jié)果重復(fù)性。
4. 應(yīng)用方案完善：提供優(yōu)化的細(xì)胞解離Protocol，針對(duì)胰島等特殊組織有專用解離方案，搭配中性蛋白酶等產(chǎn)品，滿足多樣化組織解離需求。
5. 細(xì)胞解離溫和有效：可有效解離多種組織（如脂肪、軟骨、胰島等），同時(shí)保證高細(xì)胞活率，同時(shí)無(wú)動(dòng)物源產(chǎn)品對(duì)敏感細(xì)胞損傷小，適配胰島移植等臨床應(yīng)用。
6. 酶活準(zhǔn)確適配：膠原酶活性明確，如NB6 GMP Grade膠原酶活性≥0.100U/mg（PZ法），且能根據(jù)不同組織、細(xì)胞類型提供適配的酶活組合，兼顧解離效率與細(xì)胞活性。

圖3.Solallis化學(xué)成分限定的MSC培養(yǎng)基（AF，GMP）

Solallis開發(fā)生產(chǎn)的Stem Design MSC Culture Medium化學(xué)成分限定的MSC培養(yǎng)基適用于脂肪、臍帶、骨髓等來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cell，MSC）擴(kuò)增培養(yǎng)，能夠滿足MSC干細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)、生物材料和藥物開發(fā)等研究領(lǐng)域的應(yīng)用需求。

Stem Design產(chǎn)品特點(diǎn)：

• 不含動(dòng)物源成分：可避免動(dòng)物源性成分引起的病毒感染等安全風(fēng)險(xiǎn)；
• 不含人源成分：可避免人源添加物的批次間差異導(dǎo)致的工藝不穩(wěn)定；
• 化學(xué)成分限定：批次間差異小，減輕由批次檢測(cè)造成的工作量；
• 不含抗生素：避免抗生素對(duì)細(xì)胞增殖、活性、分化和基因表達(dá)的不利影響；
• 不含EVs：適用于外泌體研究的MSC培養(yǎng)，避免外源EVs的干擾；

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