在分子生物學(xué)與基因研究的浪潮中，RNA 干擾（RNAi）技術(shù)憑借其精準(zhǔn)的基因調(diào)控能力，成為科研領(lǐng)域的重要工具，而siRNA（小干擾 RNA） 作為 RNAi 通路的核心執(zhí)行者，更是憑借高特異性、高效性的優(yōu)勢，成為基因功能研究、靶點(diǎn)驗(yàn)證的 “利器”。

什么是 siRNA？進(jìn)化保守的基因沉默衛(wèi)士
siRNA是一種小的雙鏈RNA分子（~21-25 nt），由Dicer酶（RNAaseⅢ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。它的核心功能是參與生物體內(nèi)RNA干擾保守機(jī)制，序列特異性地介導(dǎo)基因沉默。 一個成熟的siRNA具有非常明確的結(jié)構(gòu)特征：每條鏈的5'末端有一個磷酸基團(tuán)，3'末端有一個羥基。此外，每條鏈的3'端通常有兩個突出的核苷酸，這種結(jié)構(gòu)是它發(fā)揮功能的基礎(chǔ)。

siRNA的結(jié)構(gòu)示意圖

siRNA 作用機(jī)制：四步實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)基因 “敲低”

維真生物擁有多年KO細(xì)胞系建立的經(jīng)驗(yàn)，包括但不限于HEK293、HepG2、N2A、A549、PC12等細(xì)胞系，經(jīng)驗(yàn)豐富，服務(wù)有保證。具體服務(wù)內(nèi)容見下面：

① 形成與加載：當(dāng)合成的siRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后，會被一個稱為“RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（RISC）”的多蛋白復(fù)合物識別和結(jié)合。

② 鏈的選擇與激活：RISC復(fù)合物會解開siRNA的雙鏈，并降解其中一條被稱為“過客鏈”（或正義鏈）的RNA鏈。剩下的那條鏈被稱為“引導(dǎo)鏈”（或反義鏈），它被保留在RISC復(fù)合物中，形成活化的RISC。

注：決定哪條鏈?zhǔn)且龑?dǎo)鏈主要看5' 端堿基配對的相對熱力學(xué)穩(wěn)定性，其中配對不太穩(wěn)定的鏈被認(rèn)定為引導(dǎo)鏈。

③ 靶標(biāo)識別與切割：活化的RISC利用其攜帶的引導(dǎo)鏈，在細(xì)胞內(nèi)“掃描”與之序列完全互補(bǔ)的mRNA。一旦找到完美的匹配，RISC復(fù)合物中的核心蛋白——Argonaute 2（AGO2）——就會像一個“分子剪刀”一樣，在引導(dǎo)鏈的指導(dǎo)下精確地切割目標(biāo)mRNA。

④ 翻譯的終止：被切割的mRNA失去了完整性，會迅速被細(xì)胞內(nèi)的其他酶進(jìn)一步降解。mRNA的降解直接導(dǎo)致無法翻譯出對應(yīng)的蛋白質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)了對該基因表達(dá)的“沉默”或“敲低”。 值得注意的是，一個活化的RISC復(fù)合物可以循環(huán)使用，連續(xù)切割多個目標(biāo)mRNA分子，這使得siRNA的基因沉默效果非常高效。

siRNA介導(dǎo)的RNA干擾通路

siRNA 四大核心特點(diǎn)，適配多場景科研需求：

1)高特異性：僅沉默序列完全互補(bǔ)的靶基因，理論上可靶向任意基因。

2)高效性：低濃度即可顯著抑制基因表達(dá)（沉默效率常 > 90%）。

3)普適性：在動植物、真菌、哺乳動物中保守存在。

4)瞬時(shí)性：不整合基因組，效應(yīng)隨細(xì)胞分裂稀釋，適合短期研究。

化學(xué)合成 siRNA，科研篩選的優(yōu)選方案

人工化學(xué)合成的 siRNA，在保留 siRNA 核心功能的基礎(chǔ)上，還兼具諸多實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢，成為科研人員開展基因靶位點(diǎn)篩選的優(yōu)選：操作簡便易上手，無需復(fù)雜的載體構(gòu)建；轉(zhuǎn)染效率高，能快速進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮作用；對細(xì)胞或組織的毒副作用小，最大程度保證實(shí)驗(yàn)樣本的完整性；還可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模制備，滿足高通量篩選、重復(fù)實(shí)驗(yàn)等多種實(shí)驗(yàn)需求，尤其適合基因靶位點(diǎn)尚未確定時(shí)，開展 siRNA 有效片段的篩選工作。

維真生物深耕生物科研試劑領(lǐng)域，打造高品質(zhì)化學(xué)合成siRNA產(chǎn)品，嚴(yán)循 siRNA 結(jié)構(gòu)特征與設(shè)計(jì)原則，精準(zhǔn)設(shè)計(jì)序列，保證產(chǎn)品的高特異性與高效沉默效率。