① 小鼠乳腺癌細(xì)胞（4T1）為貼壁細(xì)胞，上皮細(xì)胞樣，細(xì)胞在低密度時(shí)及傳代第二天會(huì)有少量細(xì)胞為圓形或沒有上皮細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞，期間不要換液，一般傳代48h后會(huì)恢復(fù)正常。

① 4T1細(xì)胞密度越高消化時(shí)間越長(zhǎng)，建議細(xì)胞密度80%進(jìn)行傳代，消化時(shí)間約5-10min。（不同品牌、不同溫度的胰酶可能消化時(shí)間有區(qū)別）

a. 去除細(xì)胞上清，使用0.25%胰酶替代PBS清洗一遍；

b. 加入適量胰酶，放入37℃培養(yǎng)箱消化，5min左右取出觀察一次；

c. 如觀察到有大部分細(xì)胞變圓，可輕拍瓶身，如細(xì)胞不可脫落則延長(zhǎng)消化時(shí)間。

d. 如觀察到有部分細(xì)胞脫落，則將已經(jīng)脫落的細(xì)胞懸液收集到離心管中加入完全培養(yǎng)基中止消化，原瓶中再次加入新鮮胰酶重復(fù)消化一次。

e. 將分次消化的細(xì)胞懸液集中在一起進(jìn)行離心，去除上清后按照1：6-1：8的比例進(jìn)行分瓶。

③ 血清質(zhì)量差異可能引起倍增時(shí)間波動(dòng)，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。推薦使用4T1細(xì)胞專用培養(yǎng)基（TCM-G705）。