對于轉(zhuǎn)染困難的細(xì)胞，科研工作者通常會選擇病毒來導(dǎo)入目的基因。目前，腺病毒、慢病毒和腺相關(guān)病毒是常用的病毒載體工具。那么如何選擇適合您實驗體系的病毒工具，請參考下面3種病毒工具的比較：

一、慢病毒--穩(wěn)定細(xì)胞系首選

優(yōu)點:

1、宿主范圍廣：慢病毒能夠有效地感染分裂細(xì)胞、非分裂細(xì)胞，特別適合于一些難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞)和對腺病毒感染具有較強(qiáng)免疫反應(yīng)的細(xì)胞(如樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞)等，顯著提高目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率;

2、適于構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株：慢病毒能將外源基因有效地整合入宿主染色體上，介導(dǎo)目的基因長期、穩(wěn)定的表達(dá);

3、適用范圍更廣：不僅能用于體外實驗，還能用于活體動物模型，尤其是動物成瘤實驗。

缺點：有隨機(jī)插入突變風(fēng)險（致癌潛在）、體內(nèi)免疫原性高于 AAV。

什么時候選慢病毒？

體外實驗：構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá) / 敲低（shRNA）細(xì)胞系；藥物篩選、長期基因功能研究；干細(xì)胞 / 原代細(xì)胞基因修飾。

體內(nèi)實驗：腦局部注射、需要長期表達(dá)（免疫壓力不大）；CAR-T、體外編輯后回輸（ ex vivo ）。

二、腺病毒--短期高效表達(dá)突擊手

優(yōu)點:

1、宿主細(xì)胞范圍廣：包括分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞(某些抗腺病毒感染的淋巴瘤細(xì)胞除外)；

2、感染效率高：在理想感染條件下，感染率可達(dá)100%；

3、病毒滴度高：純化、濃縮后可達(dá)10^10-11pfu/mL；

4、易于擴(kuò)增：腺病毒可直接二次擴(kuò)增，慢病毒和腺相關(guān)病毒需要重新包裝；

5、不整合到染色體中，無插入致突變性；

6、理化性質(zhì)穩(wěn)定：4°C:數(shù)周，-80°C:數(shù)年。

缺點：免疫原性極強(qiáng)；表達(dá)短暫（1–2 周）；細(xì)胞毒性相對高。

什么時候選腺病毒？

體外：短期快速過表達(dá)（信號通路、蛋白功能、酶活）；大片段基因、多順反子、大啟動子。

體內(nèi)：疫苗載體；溶瘤病毒、腫瘤局部瞬時治療。

三、腺相關(guān)病毒（AAV）：體內(nèi)基因治療黃金標(biāo)準(zhǔn)

優(yōu)點:

1、宿主范圍廣：可高效感染分裂和非分裂細(xì)胞；

2、組織特異性高：多種血清型和特異性后動子，聯(lián)合運用不同重組酶系統(tǒng)，實現(xiàn)外源基因高特異性表達(dá)；

3、安全性高：ITR序列和Rep/Cap基因分別由獨立質(zhì)粒表達(dá)，未發(fā)現(xiàn)對人體致�。�

4、免疫原性低：重組AAV不帶有病毒功能及結(jié)構(gòu)蛋白，用于基因治療基本不引起免疫反應(yīng)；

5、體內(nèi)感染效率高：體內(nèi)實驗首選。

缺點：

容量最�。�<4.7 kb）；分裂快的細(xì)胞會逐漸丟失（不適合腫瘤 / 增殖旺盛細(xì)胞）。

什么時候選 AAV？

體內(nèi)實驗（首選）：神經(jīng)、肌肉、肝、心臟、視網(wǎng)膜等非分裂 / 慢分裂組織；長期在體表達(dá)、基因治療模型。

體外：不希望整合、短期 / 中期觀察；小基因（<4.7 kb）、原代神經(jīng)元 / 心肌細(xì)胞。